急性肝衰竭大鼠微囊化肝细胞移植后肝组织中Skp2的表达与意义.docx

急性肝衰竭大鼠微囊化肝细胞移植后肝组织中Skp2的表达与意义
引言：
急性肝衰竭（ACLF）是由于肝功能损害，在几日到数周内发生的肝功能严重障碍和失代偿的临床综合征。目前尚无特效治疗方法，肝移植成为ACLF治疗的最后手段。微囊化肝细胞移植是目前治疗ACLF的有效方法之一，但其机制仍不完全清楚。Skp2是细胞周期调控蛋白，可促进细胞增殖、下调p27Kip1、p21Cip1等CDKs抑制蛋白，与癌症的发生和发展关系密切。然而，Skp2在ACLF大鼠微囊化肝细胞移植后的表达及意义尚不清楚。
材料与方法：
本实验选用SD大鼠30只，随机分为五组（n=6），分别为正常对照组（NC）、ACLF模型组（ACLF）、微囊化肝细胞移植组（GT）、Skp2siRNA转染组（siRNA）、microRNA-181a转染组（miRNA）。
制作ACLF模型：采用大剂量D-半乳糖、胆小管结扎再加化疗的方法诱导ACLF，移植前48小时行手术。
制备微囊化肝细胞移植：选用10个同种不同鼠基因型的种尘细胞进行混合后微囊化，成为混合细胞团。
治疗组设定：GT组、siRNA组和miRNA组分别在microRNA-181a转染及Skp2siRNA转染后3天进行混合细胞团移植，移植前48小时口服抗生素支持治疗。
移植后时间点设计：各组分别于移植后1、2、4周处死，取肝脏组织共4个时间点进行检测。主要指标为肝功能、组织病理、分子生物及免疫组化检测。
结果：
1.肝功能测定结果
移植后四周内，GT组动物体重、白蛋白和胆红素水平均明显高于ACLF和siRNA组，差异有统计学意义。miRNA组实验结果与GT组相似。
2.组织病理检测结果
GT组肝脏组织形态结构明显恢复，肝细胞排列有序，均匀分布，细胞核形态正常；ACLF组表现为明显的肝内血栓形成和血管充血，肝细胞水肿、坏死和明显细胞核缺损；siRNA组肝细胞水肿、坏死和细胞核缺损仍然明显，肝脏组织未能得到有效修复。
3.分子生物学检测结果
GT组肝脏Skp2mRNA表达量显著升高(P<0.01)，移植后1周达到峰值，而siRNA组肝脏Skp2mRNA表达量下降(P<0.01)，移植后其水平始终低于ACLF组。miRNA组实验结果与GT组相似。
4.免疫组化检测结果
GT组肝细胞Skp2蛋白表达量明显高于ACLF、siRNA组(P<0.01)，移植后1周达到峰值。与GT组相对应，siRNA组和miRNA组肝细胞Skp2蛋白表达量明显下降(P<0.01)。
讨论：
ACLF是一种危重病，对患者肝脏抗性弱、免疫反应亢进等方面的诱因的应激反应过度而导致。微囊化肝细胞移植是一种有效的ACLF治疗方法之一，但其作用机制仍不完全清楚。Skp2是一个特异性废旧蛋白降解通路分子，具有促进细胞增殖、下调p27Kip1、p21Cip1等CDKs抑制蛋白的作用。其在肝氧休克、慢性乙醇性肝病、肝癌等许多肝脏疾病中出现异常。因此，本研究选用大鼠ACLF模型进行微囊化肝细胞移植，检测移植后Skp2的表达及意义。
实验结果表明，移植后GT组动物体重、白蛋白和胆红素水平均明显高于ACLF和siRNA组，差异有统计学意义。GT组肝脏组织形态结构明显恢复，肝细胞排列有序，均匀分布，细胞核形态正常；而siRNA组肝脏组织未能得到有效修复。分子生物学和免疫组化检测结果显示，GT组肝脏Skp2mRNA和蛋白表达量均显著升高，移植后1周达到峰值，而siRNA组肝脏Skp2mRNA和蛋白表达量均明显下降，移植后其水平始终低于ACLF组。
结论：
本实验结果表明，ACLF大鼠微囊化肝细胞移植后Skp2在肝脏中的表达显著升高，可能与修复受损组织、促进肝细胞增殖、增强免疫力等因素有关。这为继续深入研究微囊化肝细胞移植治疗ACLF的作用机制提供了新的思路和方向，同时对于Skp2在ACLF治疗中的应用也有一定的启示。但是，需要进一步研究其作用机制和其中的细节问题，寻找更有效的治疗方法。