基于SILAC技术的PRRSV感染Marc-145细胞分泌蛋白质组学研究.docx

基于SILAC技术的PRRSV感染Marc-145细胞分泌蛋白质组学研究
基于SILAC技术的PRRSV感染Marc-145细胞分泌蛋白质组学研究
摘要：
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是猪儿死亡病毒（PRDV）的一个重要的亚型，对猪养殖业造成了巨大的经济损失。PRRSV感染会导致细胞内和细胞外蛋白质的表达发生变化，而PRRSV感染后Marc-145细胞秘ome中的蛋白质表达还未完全解析。本研究旨在利用同位素标记混合的氨基酸（stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture，SILAC）技术研究PRRSV感染Marc-145细胞中蛋白质的差异表达。通过对感染组和对照组细胞提取的细胞溶胶液进行混合，运用液相色谱—串联质谱对蛋白质进行鉴定和定量分析，并通过生物信息学工具对差异表达的蛋白质进行功能分类及通路分析。结果发现，PRRSV感染导致细胞内和细胞外蛋白质表达发生了显著变化，涉及到细胞信号传导通路、免疫调节、代谢调节等多个生物学过程。这些结果提供了PRRSV感染过程中的候选标志物和潜在治疗靶点，为进一步研究PRRSV感染机制和寻找新的治疗策略提供了重要参考。
关键词：PRRSV；Marc-145细胞；SILAC；蛋白质组学；差异表达
引言：
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种具有高度变异性的RNA病毒，属于家畜病毒科猪繁殖与呼吸综合征病毒属，引起了全球猪业的一场灾难性的流行病，严重威胁了猪的健康和经济利益。PRRSV感染会导致严重的呼吸道疾病、流产、高死亡率等病症，给养猪业造成了重大的经济损失。为了探究PRRSV感染的机制及细胞响应，研究PRRSV感染后细胞内和细胞外蛋白质组的变化对于揭示PRRSV感染机制、筛选潜在的靶点以及发现新的治疗方法具有重要意义。
方法：
本研究采用同位素标记混合的氨基酸（SILAC）技术，以PRRSV感染组和对照组的Marc-145细胞为研究对象，体外培养细胞，分别采用含有稳定同位素标记（13C和15N）和非标记的L-蛋氨酸的培养基进行培养。细胞稳定同位素标记至少进行5代细胞的对比培养。感染组和对照组细胞分别收集细胞溶胶液，通过蛋白质片段提取和蛋白质胶质凝胶检测，结合液相色谱—串联质谱（LC-MS/MS）技术对蛋白质进行鉴定和定量分析。通过生物信息学工具对差异表达的蛋白质进行功能分类及通路分析。
结果：
通过SILAC技术的应用，PRRSV感染和对照组的蛋白质差异表达谱得到了全面的鉴定和定量分析。结果显示，PRRSV感染导致了大量蛋白质的表达发生了变化，包括细胞内和细胞外蛋白质。进一步功能分析发现，这些差异表达的蛋白质主要参与了多个生物学过程，包括细胞信号传导通路、免疫调节、代谢调节等。这些结果表明PRRSV感染对细胞的生理功能和代谢过程产生了重要的影响。
讨论：
本研究利用SILAC技术研究了PRRSV感染Marc-145细胞中蛋白质差异表达谱。通过这种方法，我们发现PRRSV感染后细胞内和细胞外蛋白质的表达发生了显著变化，并且这些蛋白质主要参与了多个重要的生物学过程。这些结果为进一步研究PRRSV感染机制和寻找新的治疗策略提供了重要的参考。
结论：
本研究通过SILAC技术研究了PRRSV感染Marc-145细胞中蛋白质的差异表达。结果显示PRRSV感染导致了大量蛋白质的表达发生了变化，并且这些蛋白质参与了多个重要的生物学过程。这些结果为揭示PRRSV感染机制、筛选潜在的治疗靶点以及发现新的治疗方法提供了重要的参考。
参考文献：
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