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SILAC定量蛋白质组学SILAC定量蛋白质组学1:SILAC定量蛋白质组学原理SILAC法。 1、标记:在缺乏Lys和Arg的培养基中添加Lys和Arg的同位素Lys(D4或13C615N4)、Arg(13C6,或13C615N4)等培养细胞,使蛋白质被标记成“中型”或“重型”; 2、细胞处理,如药物处理; 3、细胞裂解、提取蛋白质; 4、等量混合对照与处理组蛋白质、SDS-PAGE电泳、染色; 5、割取蛋白质条带,胰蛋白酶消化,质谱分析。1.1:SILAC定量蛋白质组学原理1.2.1:培养基准备1.2.2:细胞标记与测试1.2.2:细胞标记与测试1.2.3:实验处理1.2.3:蛋白质分离与质谱分析1.2.4:结果形式2:SILAC应用2.1:SILAC定量蛋白质组学实例2.1SchematicforSILAC2.1MSspectrashowingthefourmajorpatternsofphosphorylationobserved.SummaryoffoldchangewithHer2forall462proteins,withseveralindividualproteinshigh-lighted.Proteinswitharatio>1.5(upperredline)areconsideredasincreasedintheirtyrosinephosphorylationlevel,andthosewithratios<0.66(lowerredline)areconsideredasdecreasedintheirtyrosinephosphorylationlevel. In3T3-Her2cells,198proteinsshowedsignificantincreasesinphosphorylation,and81proteinsshowedasignificantdecrease 辉骏生物:http://www.fitgene.com/免费服务热线:400-699-16632.1Conclusion2.2SILAC研究蛋白质与蛋白质相互作用2.3SILAC研究蛋白质与DNA相互作用2.4SILAC研究蛋白质与RNA相互作用THANKS!