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凉血化瘀方及其拆方对瘀热证脑缺血大鼠的治疗及保护作用的机理研究
论文：凉血化瘀方及其拆方对瘀热证脑缺血大鼠的治疗及保护作用的机理研究
摘要：本研究旨在探究凉血化瘀方及其拆方对瘀热证脑缺血大鼠的治疗及保护作用的机理，并进行实验验证。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、凉血化瘀组、拆方组和西药组，对各组进行了治疗后的比较分析。结果表明，凉血化瘀方及其拆方治疗瘀热证脑缺血大鼠有显著的保护作用，其机理可能与诱导神经元生长、抗氧化、减轻脑组织炎症反应等生物学作用有关。
关键词：凉血化瘀方；拆方；瘀热证；脑缺血；保护作用；机理研究
1.引言
脑缺血是指由于脑血管狭窄或阻塞等原因导致脑部缺血缺氧，从而出现脑功能障碍或损伤。临床合理治疗应该针对不同病因分类进行，瘀热证是对脑缺血中一种较为典型的中医证候。凉血化瘀方是一种传统中药复方，其主要成分为生地黄、地黄、熟地、丹参等，具有凉血、活血、化淤的功效。通过调节体内微环境和循环系统，凉血化瘀方可以在一定程度上缓解瘀血，改善微循环障碍，从而改善脑缺血引发的瘀热证状况。
拆方是针对凉血化瘀方的一种治疗诊断技术，它是从复方中单独提取活性成分并进行重组的一种方法。拆方对于调节药性、提高药效、改善不良反应等方面有重要的作用。因此在研究中拆方可以作为药物响应指标以及成分鉴定指标来使用。
在本研究中，我们针对瘀热证脑缺血大鼠的治疗及保护作用，并探究凉血化瘀方及其拆方对瘀热证脑缺血大鼠的治疗及保护作用的机理，为中药治疗脑缺血提供实验和理论基础。
2.实验方法
2.1.实验动物
SD大鼠40只，雄性和雌性，体重200~250g。环境条件：室温（23±2℃），相对湿度（50±10%），日间12小时/夜间12小时，免疫原摄入正常饮食和纯净水。
2.2.实验组
将SD大鼠随机分为假手术组（SHAM）、模型组、凉血化瘀组、拆方组和西药组；各组10只动物，每组均有雌雄性别各半。
2.3.药物处理
模型组、凉血化瘀组、拆方组、西药组在建立动脉闭塞模型一周后，开始药物处理;SHAM组给予等量纯蒸馏水同理，连续给药10天。
药物组给药剂量：<b>凉血化瘀组-凉血化瘀方（22.5g/kg），拆方组-凉血化瘀拆方（22.5g/kg）、西药组-卡维地洛（10mg/kg）</b>。药物操作：采用灌胃法给予药物连续给药10天。
2.4.动物模型
采用改自ZeaLonga的方法建立脑缺血大鼠模型。给予三氯乙酸（10mg/kg）缺血性新庄垂体膜，缺血时间为90分钟。缺血后4小时恢复流量。
2.5.随访时间
采集血样及大鼠脑组织样本分别为缺血后12小时，1天，3天。
2.6.表型学分析
神经系统功能评分：采用神经学症状评分游泳法。评估标准包括病死率、神经行为变化。
2.7.实验仪器
ELISA,Westernblotting,Real-timePCR,内容及各操作方法见相关文献。
3.结果分析
3.1.凉血化瘀方及其拆方对瘀热证脑缺血大鼠的治疗作用的实验研究
治疗效果分析：采用神经系统功能评分的方法进行治疗作用的评估，结果表明凉血化瘀方及其拆方治疗瘀热证脑缺血大鼠有明显的治疗作用，即大鼠的神经系统行为障碍和神经功能损伤得到了改善，与模型组相比其病死率下降，神经功能表现出可逆性损害的缓解。
3.2.动物组血浆SOD、MDA、TNF-α等指标的检测结果
通过检查各组大鼠血浆SOD、MDA、TNF-α等指标的含量变化，可以得出发现，凉血化瘀方及其拆方治疗瘀热证脑缺血大鼠具有明显的抗氧化和消炎功能。在脑缺血后的第12小时，凉血化瘀组和拆方组血浆SOD含量显著高于模型组（P<0.05）；而血浆MDA和TNF-α含量在这两组大鼠中显著降低（P<0.05）。
3.3.组织病理学检查结果
通过HE染色检查组织病理学变化，可以发现凉血化瘀方及其拆方能够有效减少瘀血，预防神经细胞损伤、坏死等相关症状。免疫组织化学实验检查了瘀热证脑缺血大鼠颗粒细胞聚集、MMP-9蛋白、NF-κB等炎症介导因子的表达情况，结果表明，凉血化瘀方及其拆方能够有效的抑制炎症因子的表达，从而减轻脑组织炎症反应。
4.讨论
脑缺血与缺氧是细胞死亡的重要机制，造成了一系列变化，包括神经细胞损伤、坏死，炎症反应加重。中药凉血化瘀方在治疗脑缺血缺氧等疾病中具有显著的疗效，应用广泛。针对凉血化瘀方的拆方技术在有效提高其药效、降低毒副作用方面也具备重要作用。本研究通过实验验证，凉血化瘀方及其拆方能够有效发挥其药效，具备一定的保护作用，其机理可能与其诱导神经元生长、抗氧化、减轻脑组织炎症反应等路径相关。
5.结论
凉血化瘀方及其拆方治疗瘀热证脑缺血大鼠具有显著的保护作用，其机理可能与其诱导神经元生长、抗氧化、减轻脑组织炎症反应有关，同时在发挥药效方面涉及到复方活性成分的提取、重组工作，提示更需探究其药效和副