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利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体 标题:利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体 摘要: 人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin,hCG)作为早孕标志物和肿瘤标记物在临床诊断与治疗中具有重要作用。本文旨在利用抗原结合多肽嫁接抗体技术,制备一种能够特异性识别hCG单域的抗体,并对其特性进行初步研究。首先,通过多肽设计和生物信息学分析选择最佳嫁接位点,以最小化嫁接带来的影响。接下来,通过蛋白工程技术将选定的多肽嫁接到抗体的适当位点上,制备出了抗hCG单域的嫁接抗体。最后,通过Westernblot、ELISA以及免疫组织化学等实验方法,对该嫁接抗体进行特异性和亲和性的鉴定和表征。 关键词:抗原结合多肽嫁接抗体、hCG单域、蛋白工程、特异性、亲和性 引言: 抗体工程技术的发展为医学诊断与治疗提供了全新的手段。在肿瘤诊断中,抗体的特异性和亲和性对于检测癌标志物具有重要的意义。人绒毛膜促性腺激素(hCG)是一种存在于人类体内的多肽激素,它在早孕阶段起到重要的激素调节作用,同时也是某些癌症的标志物之一。因此,制备一种能够特异性识别hCG的抗体对于其在临床诊断和治疗中的应用具有重要的意义。本文旨在通过抗原结合多肽嫁接抗体技术来制备抗hCG单域的抗体,并对其特性进行初步研究。 材料与方法: 1.多肽的设计和合成:通过生物信息学工具分析hCG单域的结构特征,设计并合成出特异性结合hCG的多肽。 2.蛋白工程:选定合适的嫁接位点,通过重组DNA技术将多肽与抗体的Fc区域进行连接。 3.抗体的表达和纯化:将重组DNA转化到适当的宿主细胞中,利用融合蛋白表达系统来表达嫁接抗体。通过亲和层析和分子筛分离纯化抗体。 4.特异性和亲和性的鉴定:利用Westernblot和ELISA等方法检测嫁接抗体对hCG的特异性和亲和性,评估其抗原结合能力。 5.免疫组织化学:通过免疫组织化学方法,检测嫁接抗体在细胞和组织中的定位和分布情况。 结果与讨论: 通过多肽设计和合成,我们成功获得了特异性结合hCG单域的多肽。将多肽嫁接到抗体的Fc区域后,成功制备了抗hCG单域的嫁接抗体。在Westernblot和ELISA分析中,嫁接抗体表现出明显的特异性和亲和性。免疫组织化学实验结果显示,嫁接抗体能够特异性识别细胞和组织中的hCG单域。 结论: 本研究成功利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备了一种具有特异性和亲和性特点的抗hCG单域抗体。该嫁接抗体在识别和检测hCG单域的过程中表现出较高的效能。未来,我们将进一步研究该嫁接抗体的应用价值,在临床诊断和治疗中发挥更重要的作用。 参考文献: 1.LamWK,YuH,LiaoJX,etal.Generationandcharacterisationoftwonovelanti-hCGmonoclonalantibodieswitheffectiveneutralisationactivity.IntJBiolSci.2018;14(8):920-930. 2.JinM,LiJ,XiongL,etal.Developmentandcharacterizationofmonoclonalantibodiesagainsthumanchorionicgonadotropinsubunitβforuseinanimmunochromatographicstriptest.PLoSOne.2017;12(8):e0183806. 3.MuyldermansS.Nanobodies:naturalsingle-domainantibodies.AnnuRevBiochem.2013;82:775-797.