液相色谱柱的应用-PPT.ppt

液相色谱柱的应用目录一、HPLC分离原理分配过程分配系数-K容量因子k色谱理论：塔板理论--柱分离效能指标色谱理论：速率理论--影响柱效的因素色谱理论：速率理论--影响柱效的因素色谱理论：分离度样品组分的分离HPG-3x00RS泵
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高性能－UltiMate3000x2三元梯度系统液相色谱柱的应用色谱柱的构造色谱柱的构造
液相色谱柱的构造色谱柱的构造液相色谱柱的安装液相色谱柱的安装连接接管必须注意：色谱连接注意事项连接管线与接头液相色谱柱的应用分离模式的选择
1.填料：硅胶、氧化铝、聚苯乙烯等
2.键合相：C4、C8、C18、苯基、氨基等（封端技术）
3.孔径：60-100A分子量<2000
300A分子量>2000
4.粒径：2um-10um
5.内径：10mm以下（分析），10mm以上（制备）
6.长度：10、15、25、30mm
正相&反相色谱正相色谱反向色谱法各种反相填料的使用比例反向色谱法流动相不同混合溶剂的粘度比较柱填料基质色谱柱的性能参数色谱柱的物理性质硅胶纯度A型、B型硅胶比较金属敏感测试色谱柱子的尺寸颗粒形状与大小填料粒度粒径的影响粒径与柱效核壳U-HPLC的科学原理流速设定色谱柱尺寸和填料粒径的影响比表面积与孔径比表面积的比较比表面积与孔径的影响大孔径填料适用于大分子分析300Å孔径可改善蛋白质和多肽峰形300Å孔径可改善大分子的峰形色谱柱化学性质键合类型碳载量碳载量碳载量封端技术固定相键合
二甲基硅烷
三基封端技术（酰胺基）超临界封端技术碱灭活测试封端技术比较保留值与pH的关系保留值与pH的关系pH值对保留时间的影响保留值与pH的关系复杂组分的流动相pH选择技巧液相色谱柱的应用色谱柱的评价色谱柱的评价溶剂前处理溶剂前处理基线问题分析液相色谱柱的使用液相色谱柱的使用液相色谱柱的使用色谱柱柱内体积和平衡时间液相色谱柱的使用USP允许调节的色谱条件范围流动相调整的基本原则（等度）样品溶剂溶解强度的影响样品溶剂溶解强度的影响缓冲液对中性物质的影响增加缓冲液浓度减少拖尾流动相pH值的选择反相HPLC常用缓冲液三乙胺对碱性成分峰形的影响酸对酸性组分的峰形的影响柱容量对峰型的影响液相色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C18
色谱柱尺寸:4.6x250mm5µm
UV:254nm流速:1mL/min.等度和梯度的影响等度和梯度获得柱效不同液相色谱柱的应用色谱柱的保存色谱柱的保存色谱柱的维护保养色谱柱易出现的问题修补前后现象样品问题常见问题及解决方法色谱柱子污染对比色谱柱的修复柱头塌陷修复办法液相色谱柱再生液相色谱柱再生ThankYou!