第六章-植物离体培养育种.ppt

第六章植物离体培养育种Tissuecultureandbreeding组织培养的概念利用植物体的器官、组织或细胞，通过无菌操作接种于人工配制的培养基上，在一定的光照和温度条件下进行培养，使之生长发育的技术称为组织培养按培养材料分为（Gamborg等)：类别－依外植体的不同划分植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广泛进行组织培养。发展简史1958年，英国科学家Steward等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，不但使细胞全能性理论得到证实，而且为组织培养的技术程序奠定了基础。
1962年，Murashinge和Skoog在烟草培养中筛选出至今仍被广泛使用的MS培养基。
1964-1966年，印度科学家Guha和Maheswari在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。
1972年，Carlson通过两个种的烟草原生质体融合培养，获得了第一个体细胞杂交的杂种植株。植物组织培养在技术上的发展植物组织培养在农业上的应用组织培养的意义愈伤组织培养是最为常见的组织培养方式？按培养方法：固体培养、液体培养、看护培养、微室培养、包埋培养等外植体（Explants）生物学原理植物细胞的全能性（totipotent）：是指植物每个细胞都具有该植物体的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。植物细胞全能性的表达离体的植物器官、组织、细胞植物组织培养特点技术用途MS培养基它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。
B5培养基是1968年由Galmborg等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物。White培养基是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作White改良培养基，提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。
N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。
KM—8P培养基它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。包括无机成分和有机成分。无机成分包括大量元素和微量元素。有机成分主要包括糖类、维生素、氨基酸和酰胺类、含氮碱基、生长调节剂、自然复合物（如水解蛋白、酵母提取物、果肉和果汁等）以及其他成分如琼脂等。植物对无机盐类的需求具有广泛的一致性，偶然加以变动。一般多采用蔗糖。维生素中最关键的是B1，一般用量为0.1-0.4毫克/升。氨基酸和酰胺只用于某些组织培养，而在器官增殖阶段加入腺嘌呤也可能是需要的。关键的有机成分主要是激素和细胞分裂素。可以采用固体或者液体培养基，根据不同植物和不同培养阶段而定。固体培养基中以琼脂质量好，配制时可以通过调节pH值来达到适合的凝胶状态即可。液体培养基养时也有固定和搅动两种。大量元素激素几种激素的配制方法激素配比模式GrowthmediumisoptimisedforregenerationofplantletsNoBAP
NoBAP
有机物质(Vitaminsandaminoacids)固化剂（gellingagent）碳源pH计培养基的选择和配制母液的配制以KNO3为例无菌室培养基器皿和接种工具的灭菌常用方法培养所需环境条件

光照强度：一般而言，愈伤组织的形成并不需要光照；培养前期1000-4000lx，后期10000lx。
光照时数：不同培养的组织其光照时间不同，如烟 草愈伤组织采用1000lx16小时/日培养；
而花椰菜组织培养则以4000lx9小时/日
光照为宜。
光质：一般采用日光灯作为光源。组织培养中关键
的器官形成作用，是种光形态发生现象，
是受光敏色素控制的。

温度：一般习惯将培养物置于恒温下，通常应用的温度
为25OC左右。
§3通过花药及花粉培养的单倍体育种花药及花粉培养工作的进展花药和花粉培养技术花药和花粉培养技术花药培养和花粉培养之比较花药培养技术花药材料的选取花药培养技术步骤花粉培养花粉培养技术步骤影响花药（粉）培养的因素培养前低温预处理

培养基与培养方式的影响再生植株倍性和单