安捷伦液相色谱柱的选择与保养.ppt

分离模式的选择硅胶基质-pH3~8
Al2O3.nH2O-pH1~14
聚合物基质-pH1~14C-18柱---性能影响因素硅胶纯度
•填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
色谱柱尺寸
•填料床的长度和内径
颗粒形状
•球型或不规则型
粒径
•平均颗粒直径,通常3-10µm
表面积
•颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/gram表示
孔径
•颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围80-300Å键合类型
•单体键合-键合相分子与基体单点相连
•聚合体键合-键合相分子与基体多点相连
碳覆盖率
•与基体物质相连的键合相的量
封端
•键合步骤之后,用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来A类硅胶
OriginalZORBAXSIL(1970s)
由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的pKa低),导致碱性化合物发生拖尾
ZORBAX®生产工艺色谱柱尺寸---对色谱分离的影响

•短柱(15-100mm)-运行时间短,柱压低
•长柱(150-250mm)-分辨率高,运行时间长

•窄径柱(2.1mm)-检测器灵敏度高
•宽径柱(3-21.2mm)-载样量高颗粒形状---对色谱分离的影响

当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时,球型颗粒可以降低柱压,延长色谱柱寿命表面积---对色谱分离的影响

高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力,柱容量和分离度.表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态,对于梯度淋洗尤为重要大孔径填料适用于大分子分析300Å孔径可改善蛋白质和多肽峰形300Å孔径可改善大分子的峰形键合类型---对色谱分离的影响

单齿键合：
提高传质速率,加快色谱柱平衡

双齿键合：
增加色谱柱稳定性,增加色谱柱的载样量
碳覆盖率---对色谱分离的影响

高碳覆盖率：提高分辨率,分析时间长
低碳覆盖率：缩短运行时间固定相键合
二甲基硅烷
液相柱---保留值与pH的关系液相柱---保留值与pH的关系保留时间液相柱---保留值与pH的关系Zorbax色谱柱发展史键合相-适用pH范围
SB-C18
80A&300A
pH:1~8安捷伦HPLC色谱柱维护保养Zorbax色谱柱=高柱效+长寿命色谱柱柱内体积和平衡时间清洗液相色谱柱HPLC常用的色谱柱接头如果伸出的管线长度过长，可能漏液活塞杆与密封圈样品:
尿嘧啶
苯酚
N,N-二甲基苯胺检测器用灯检测器用灯检测器用灯1.DAD的氘灯替代VWD的氘灯
关闭灯电源,冷却5min以上
将lamp设定的VWDconfiguration的灯类型改为2140-0590

2.灯能量测试
以水为流动相
灯预热10min以上
在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准,将紫外灯的使用时间归零DAD故障诊断与维护Diagnosis界面故障原因分析
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