安捷伦液相色谱柱的选择与保养课件.ppt

HPLC色谱柱选择与维护保养分离模式的选择硅胶基质-pH3~8Al2O3.nH2O-pH1~14聚合物基质-pH1~14C-18柱---性能影响因素硅胶纯度•填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度色谱柱尺寸•填料床的长度和内径颗粒形状•球型或不规则型粒径•平均颗粒直径,通常3-10µm表面积•颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/gram表示孔径•颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围80-300Å键合类型•单体键合-键合相分子与基体单点相连•聚合体键合-键合相分子与基体多点相连碳覆盖率•与基体物质相连的键合相的量封端•键合步骤之后,用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来A类硅胶OriginalZORBAXSIL(1970s)由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的pKa低),导致碱性化合物发生拖尾ZORBAX®生产工艺色谱柱尺寸---对色谱分离的影响•短柱(15-100mm)-运行时间短,柱压低•长柱(150-250mm)-分辨率高,运行时间长•窄径柱(2.1mm)-检测器灵敏度高•宽径柱(3-21.2mm)-载样量高颗粒形状---对色谱分离的影响当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时,球型颗粒可以降低柱压,延长色谱柱寿命表面积---对色谱分离的影响高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力,柱容量和分离度.表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态,对于梯度淋洗尤为重要大孔径填料适用于大分子分析300Å孔径可改善蛋白质和多肽峰形300Å孔径可改善大分子的峰形键合类型---对色谱分离的影响单齿键合：提高传质速率,加快色谱柱平衡双齿键合：增加色谱柱稳定性,增加色谱柱的载样量碳覆盖率---对色谱分离的影响高碳覆盖率：提高分辨率,分析时间长低碳覆盖率：缩短运行时间固定相键合二甲基硅烷液相柱---保留值与pH的关系1液相柱---保留值与pH的关系保留时间液相柱---保留值与pH的关系复杂组分的流动相pH选择技巧Zorbax色谱柱发展史键合相-适用pH范围SB-C1880A&300ApH:1~8安捷伦HPLC色谱柱维护保养Zorbax色谱柱=高柱效+长寿命色谱柱柱内体积和平衡时间清洗液相色谱柱<0.12mm内径管线用于毛细管HPLC中<2.1内径色谱柱0.17mm内径管线用于分析型HPLC中2.1~4.6内径色谱柱0.25mm内径管线用于半制备型HPLC中9.4内径色谱柱0.5mm内径管线用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱HPLC常用的色谱柱接头如果伸出的管线长度过长，可能漏液活塞杆与密封圈样品:尿嘧啶苯酚N,N-二甲基苯胺检测器用灯检测器用灯检测器用灯1.DAD的氘灯替代VWD的氘灯关闭灯电源,冷却5min以上将lamp设定的VWDconfiguration的灯类型改为2140-05902.灯能量测试以水为流动相灯预热10min以上在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准,将紫外灯的使用时间归零DAD故障诊断与维护Diagnosis界面故障原因分析样品溶剂溶解强度中性分析时为何要使用缓冲液？02.55.07.5TEA对碱性成分峰形的影响竞争酸对酸性组分的峰形的影响色谱柱技术–5988-6467EN流动相对色谱的影响(TE40)液相分析-小诀窍环保生物制药生物制药色谱柱技术–5988-6454EN使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性(TE32)色谱柱技术–5988-6428EN不同硅胶类型比较(TE1)有机化学–5988-6366ENpH对苯胺取代物分析的影响(ORCH1)食品分析–5988-6360EN流动相强度对单糖和二糖分离的影响(FD4)色谱柱技术–5988-6453ENZORBAXEclipse系列色谱柱的选择性(TE31)生物制药色谱柱技术–5988-6467EN流动相对色谱的影响(TE40)倍数前缀符号1,000,000,000,000,000,000=1018exa-E1,000,000,000,000,000=1015peta-P1,000,000,000,000=1012tera-T1,000,000,000=109giga-G1,000,000=106mega-M1,000=103kilo-K100=102hecto-H10=101deka-da0.1=10-1deci-d0.01=10-2centi-c0.001=10-3milli-m0.000001=10-6micro-u0.000000001=10-9nano-n0.000000000001=10-12pico-p0.000000000000001=10-15femto-f0.000000000000000001=10-18atto-appm(partpermillion)=mg/kg,ug/g,ng/mg,pg/ug,mg/