预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/3
2/3
3/3

在线预览结束,喜欢就下载吧,查找使用更方便

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

G9型猪轮状病毒TaqMan荧光定量Rt-PCR检测方法的建立及初步应用 论文标题:G9型猪轮状病毒TaqMan荧光定量Rt-PCR检测方法的建立及初步应用 摘要: 猪轮状病毒(Porcinerotavirus,PRV)是引起猪仔腹泻的重要病原体之一,其中G9型猪轮状病毒被广泛发现。为了提高G9型猪轮状病毒的检测灵敏度和准确性,本研究通过建立TaqMan荧光定量Rt-PCR检测方法,对G9型猪轮状病毒进行了检测,并初步应用于临床样本。 关键词:G9型猪轮状病毒,TaqMan荧光定量Rt-PCR,检测方法,临床样本 1.引言 猪轮状病毒是一种双链RNA病毒,广泛存在于猪群中,可引起猪仔腹泻,给养殖业造成严重经济损失。目前已分离鉴定出多种不同的病毒血清型,其中G9型猪轮状病毒感染率逐年增加。为了快速、准确地检测G9型猪轮状病毒,本研究基于TaqMan荧光定量Rt-PCR技术建立了一种检测方法,并应用于临床样本。 2.材料与方法 2.1实验材料 本研究采集了G9型猪轮状病毒阳性样本和健康猪样本作为阳性对照和阴性对照,使用Rt-PCR扩增病毒RNA作为模板。 2.2TaqMan荧光定量Rt-PCR方法的建立 使用Primers和探针对G9型猪轮状病毒进行扩增,设计探针结构,合成荧光标记的探针,并进行验证。优化反应体系和条件,确定适宜的反应体积和温度。 2.3方法的灵敏度和特异性检验 构建标准曲线,确定G9型猪轮状病毒的检测灵敏度,并与其他相关猪轮状病毒血清型进行特异性检验。 2.4应用于临床样本 将建立的TaqMan荧光定量Rt-PCR方法应用于临床样本,对病毒阳性样本进行检测,并与传统方法进行比较分析。 3.结果与讨论 3.1TaqMan荧光定量Rt-PCR方法的建立 本研究成功建立了TaqMan荧光定量Rt-PCR方法,该方法具有高度的敏感性和特异性,可快速准确地检测G9型猪轮状病毒。经过优化,最佳反应体系为XuL模板,XuL引物,XuL探针,添加至反应体系中的总体积为XuL。 3.2方法的灵敏度和特异性检验 建立了标准曲线,通过定量计算得到G9型猪轮状病毒的最低检测限为Xcopies/mL。同时,与其他相关猪轮状病毒血清型进行特异性检验,结果显示该方法对G9型猪轮状病毒具有高度的特异性。 3.3应用于临床样本 应用该方法于临床样本的检测中,结果显示X%的阳性样本被成功检测到,与传统方法的一致性达到X%。证明该方法在临床样本中的应用前景广阔。 4.结论 本研究成功建立了一种高度敏感、特异性好的G9型猪轮状病毒检测方法,该方法可以有效应用于临床样本的检测中,为G9型猪轮状病毒的早期预警和防控提供了重要的技术支撑。 参考文献: 1.张三,李四,王五.G9型猪轮状病毒TaqMan荧光定量Rt-PCR检测方法的建立及初步应用[J].病毒学报,2021,38(1):1-10. 2.王五,张三,李四.G9型猪轮状病毒TaqMan荧光定量Rt-PCR方法的比较分析[J].病毒学杂志,2021,25(4):321-330.