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三氧化二砷抑制子宫内膜癌生长的体内和体外实验研究
摘要
子宫内膜癌是一种发生在子宫内膜组织上的恶性肿瘤。目前治疗子宫内膜癌的药物主要是激素和化疗药物，但是由于药物副作用大，且易出现耐药性，因此需要寻找更有效的治疗方法。本研究采用了三氧化二砷作为治疗子宫内膜癌的药物，并通过体内和体外实验研究其抑制子宫内膜癌生长的效果。结果显示，三氧化二砷能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力，同时通过调节细胞周期和凋亡相关蛋白的表达来实现其抑制作用。因此，本研究认为三氧化二砷有望成为一种有效的治疗子宫内膜癌的新药物。
关键词：三氧化二砷；子宫内膜癌；细胞周期；细胞凋亡
Abstract
Endometrialcancerisamalignanttumorthatoccursintheendometrialtissue.Currently,thedrugsusedtotreatendometrialcanceraremainlyhormonesandchemotherapydrugs,butduetotheirsignificantsideeffectsandeasydevelopmentofdrugresistance,itisnecessarytofindmoreeffectivetreatments.Thisstudyusedarsenictrioxideasadrugtotreatendometrialcancerandstudieditsinhibitoryeffectonendometrialcancergrowththroughinvivoandinvitroexperiments.Theresultsshowedthatarsenictrioxidecouldinhibittheproliferationandinvasionofendometrialcancercells,andachieveitsinhibitoryeffectsbyregulatingtheexpressionofcellcycleandapoptosis-relatedproteins.Therefore,thisstudybelievesthatarsenictrioxideisexpectedtobecomeaneffectivenewdrugforthetreatmentofendometrialcancer.
Keywords:arsenictrioxide;endometrialcancer;cellcycle;cellapoptosis
一、引言
子宫内膜癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，发病率近年来呈逐年上升的趋势，主要表现为异常子宫出血和腹部不适。目前，治疗子宫内膜癌的主要方法是手术切除、辅以放疗、化疗等综合治疗，但其副作用大、易导致耐药性等问题限制了其临床应用（Quirk,Natarajan,&Osann,2005）。
三氧化二砷是一种中国传统草药中的中药成分，具有很好的抗癌活性。近年来，越来越多的研究表明三氧化二砷对于多种肿瘤细胞具有很好的生长抑制和凋亡诱导作用（Ning,Xi,&Han,2017）。
本研究旨在通过体内和体外实验研究三氧化二砷对于子宫内膜癌生长的影响，探讨其作用机制，为临床治疗子宫内膜癌提供新的治疗思路和行动指导。
二、材料与方法
2.1细胞及试剂
本研究采用子宫内膜癌细胞系KLE，所有细胞都来自于中国科技大学微生物研究所的细胞库，并在每两周内对细胞进行传代。三氧化二砷（三宝药业，化学纯）在PBS中溶解制成浓度为10mg/mL的口服制剂，用于体内实验研究。在细胞实验中，三氧化二砷被溶解在DMSO中，制成10mM的储存液，并在实验中按照一定比例稀释。
2.2细胞增殖实验
细胞增殖实验采用MTT法。将1×104个细胞种植在96孔板中。细胞接种后，将三氧化二砷加入不同的孔中，分别为0、2.5、5、10μM。24小时、48小时和72小时后，加入MTT溶液并继续培养4小时，最后加入DMSO溶液溶解晶体。通过多波长光度计读取各孔中细胞的吸光度，即可计算出每组细胞增殖率。
2.3细胞凋亡实验
细胞凋亡实验采用AnnexinV-FITC/PI双染法。细胞接种后，将三氧化二砷加入不同的孔中，浓度分别为0、2.5、5、10μM，继续培养24小时。对于美国MCDB基因组，公司提供的产品是AnnexinV-FITC/PI双染剂，并根据说明书进行操作。通过流式细胞术分析细胞凋亡率。
2.4蛋白质印迹实验
用细胞蛋白提取液提取蛋白，后蛋白浓度通过BCA测定法测定。通过SDS-PAGE蛋白质分离，转移到PVDF膜上。将PVDF膜孵育在5%的非脂乳粉中，传递到对应的一级抗体上，转移到HRP化合物上，并用RIPA缓冲液浸泡。最后用观察试剂检测并清除HRP。