《临床生物化学检验》-诊断酶学.ppt

第五章
诊断酶学一、概述一、酶的概念与特征（一）酶的组成、结构与功能
1.酶的本质和特征
⑴酶的化学本质：绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸和酶蛋白组成的复合体，极少数酶是核酸。
⑵酶除了具有蛋白质的理化性质、一般催化剂的共同性质外，还具有极高的催化效率、高度的特异性（specificity）及催化作用的可调节性等特点。
⑶由酶所催化的反应称为酶促反应。
酶促反应过程中的几个概念：
酶活性（activity）；底物（substrate）；
产物（product）；
激活剂（activator）；抑制剂（inhibitor）
⑷核酶（ribozyme）：具有催化作用的核糖核酸。2.酶的结构和功能
⑴酶和一般蛋白质一样，具有一、二、三乃至四级结构。
单体酶（monomericenzyme）
寡聚酶（oligomericenzyme）
多酶体系（multienzyme）
多功能酶或串联酶（tandemenzyme）

⑵单纯酶（simpleenzyme）：仅由氨基酸残基构成的酶。
结合酶（conjugatedenzyme）：除含蛋白质外，还含有非蛋白部分（金属离子或小分子有机化合物），前者称为酶蛋白，后者称为辅因子。二、同工酶的概念与特征酶三、工具酶
一、酶活性测定2.间接法采用酶偶联反应是间接法测定酶活性的主要技术特点。
(1)最简单的酶偶联反应（单底物反应且只有一个工具酶）模式为：

Ex：被测定酶C：被检测物质Ei：指示酶
Ex催化的反应称为始发反应，产生被检测物质产物C的反应称为指示反应。
(2)如果一些酶促反应找不到合适的指示酶与其直接偶联，此时往往还可在始发反应和指示反应之间加入另一种酶，将二者连接起来，此反应称为辅助反应。模式为：

一般习惯将最后一个酶称指示酶Ei，其他外加的酶称为辅助酶（Ea）。
(3)偶联反应中存在几个时相：
①预孵育期：反应一开始只存在底物A，不存在指示酶的反应。
②延滞期：加入底物启动反应，在启动后的一段短时间内，产物B开始出现并逐渐增加，但仍处于较低水平，指示酶反应速度也较低，不能代表测定酶的反应速率Vx。
③稳态期：产物B增加到一定程度时，Ex和Ei催化的反应速率相同，达到了稳态期。此阶段特定波长处（如340nm）吸光度才会有明显的线性变化。

(4)指示酶的选择
①Vx/(Km)x=Vi/(Km)i
Vi：指示酶的用量Vx：测定酶的测定上限
(Km)x：分别是测定酶(Km)i：指示酶的米氏常数

②米-曼氏方程
在酶偶联反应中，指示酶催化反应速率Vi的计算公式为：

式中Vx为测定酶的测定上限，(Km)i为指示酶的米氏常数，P为中间产物浓度。

(三)干扰因素
1.其他酶和物质的干扰
2.酶的污染
3.非酶反应
4.分析容器的污染
5.沉淀形成
酶2.酶活性浓度单位临床上测定的不是酶的绝对量而是浓度。酶活性浓度以每单位体积所含的酶活性单位数表示。
（1）表示方法目前在临床化学中，各国学者几乎都习惯用U/L来表示体液中酶催化浓度。1U/L=16.67nkatal/L。
（2）酶活性浓度单位的计算用连续监测法进行酶活性测定时，不需作标准管或标准曲线，根据摩尔吸光系数很容易进行酶活性浓度的计算。摩尔吸光系数（ε）的定义为：在特定条件下，一定波长的光，光径为1.00cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00mol/L时的吸光度。
如用连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化（A/min），以U/L表示酶活性浓度时，则可按下式进行计算：

式中：V—反应体系体积（ml）ε—摩尔吸光系数（cm2·mol-1）
v—样品量（ml）L—比色杯光径（cm）
△A—吸光度变化106—将mol换算成μmol

临床常用血清酶的测定方法与参考区间（37℃）2.系数K值的类型与计算
系数K值只能供用户通过计算式及求实测K值时参考，不能直接用于酶活性浓度的计算。
2.酶活性浓度测定的参考系统
IFCC于1998年决定建立包括下列要素的测定酶催化浓度的参考系统：
①参考测定方法，以现有的IFCC30℃的参考方法作为基础，制定了一套37℃的标准操作方法（SOPs）；
②参考实验室网络，选择一组参考实验室（包括厂家实验室），为之提供必要的技术和仪器，使之在计量学高水平上按参考测定方法（SOPs）进行测定；
③参考物，参考实验室网络对现有的BCR参考物进行重新认证。
建立原级参考方法
制备原级参考物
建立参考实验室网络
二、酶质量测定三、同工酶检测一、血清酶
（一）血清酶的来源与去路
1.血清酶的来源

2.血清酶的去路
血清酶的半寿期是指酶失活至原来活性一半时所需时间（T1/2），一般以半寿期来代表酶从血中清除的快慢。
几种血清酶的半衰期与分子量（三）血清酶的临床应用
正常