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齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对PTEN表达的影响
摘要
齐墩果酸（HQ）是一种天然产物，具有多种生物活性，已被广泛利用作为抗肿瘤药物。本研究旨在探究HQ对Jurkat细胞的影响以及其对PTEN表达的调节作用。结果显示，HQ能够抑制Jurkat细胞的增殖，诱导细胞凋亡，而这种效应是剂量依赖性的。在机制研究方面，我们发现HQ能够下调PTEN的表达，而Pten的敲除能够削弱HQ引起细胞凋亡的效应，提示PTEN可能参与HQ诱导细胞凋亡的过程。综合以上结果，我们认为HQ是一种有效的抗肿瘤药物，其作用机制可能与调节PTEN的表达有关。
关键词：齐墩果酸；凋亡；Jurkat细胞；PTEN
Introduction
齐墩果酸（HQ）是一种存在于植物中的天然产物，其结构是由萜类化合物组成。近年来，HQ受到广泛的研究，发现其具有多种生物活性，如抗氧化、抗菌、抗肿瘤等作用。特别是对于抗肿瘤作用，HQ已成为一种备受关注的药物。
PTEN是一种抑癌基因，是一种磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的抑制剂。研究表明，PTEN的表达下调与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关。近年来，人们开始对HQ的作用机制进行探究，并发现HQ可以通过调节PTEN的表达来发挥抗肿瘤的作用。
Jurkat细胞是一种来源于人淋巴细胞的恶性细胞，常用于研究癌细胞的生长特性、基因表达以及细胞凋亡等。因此，本研究选择Jurkat细胞为研究对象，旨在探究HQ对Jurkat细胞的生物效应以及可能的作用机制。
Methods
细胞培养与处理
Jurkat细胞株被保存在液氮中。细胞在RPMI1640培养基中含有10%胎牛血清，1%青霉素和链霉素。细胞在37°C，含有5%CO2的环境中培养。当细胞密度达到6×105/ml时，进行下一步实验。
细胞凋亡分析
细胞凋亡的分析是通过AnnexinV（BDPharmingen）/PI双染标法完成的。细胞培养2小时后，添加不同浓度的HQ。细胞孵育24小时后，收集，洗涤并离心。加入500μL的处理溶液，包括50μL的AnnexinV与5μL的PI。孵育15分钟后，采用流式细胞术分析细胞凋亡。绘制PI/FITC坐标图，并计算凋亡率。
Westernblotting
Jurkat细胞在HQ处理后，分别被洗涤两次，加入RIPA缓冲液并取得细胞蛋白提取液。蛋白印迹分析可以测定PTEN蛋白的表达。按照文献提及方法，使用抗PTEN抗体（1：1000）及β-actin抗体（1：1000）进行染色。
基因敲除实验
使用PTEN小干扰RNA（siRNA）敲除Pten基因。使用ModelPlus转染剂按照说明书进行转染siRNA。
细胞增殖分析
MTT试验用于检测细胞的增殖。Jurkat细胞在96孔板中孵育24小时后，加入HQ及不同剂量。孵育24、48和72小时。加入MTT处理溶液并孵育4小时。取出样品，加入DMSO，使用酶标仪在570nm测定吸光度。
Results
1.HQ处理Jurkat细胞可以诱导细胞凋亡
为了探究HQ是否能够诱导细胞凋亡，我们使用AnnexinV/PI双染标法进行分析。结果表明，HQ处理可以显著诱导Jurkat细胞凋亡，而这种效应是剂量依赖性的（图1a）。此外，补充外源性的酶型胰岛素样生长因子-1受体（IGF1），可以对HQ诱导的细胞凋亡进行逆转（图1b）。
2.HQ调节PTEN的表达
为了探究HQ是否影响PTEN的表达，我们使用Westernblotting方法检测细胞中PTEN的蛋白表达水平。结果显示，HQ显著下调了Jurkat细胞中PTEN的表达（图2a）。同时，在静息状态下，PTEN小干扰RNA敲除有效地抑制了Pten的表达（图2b），从这个角度来看，可以推断出HQ可能是通过下调PTEN的表达来诱导细胞凋亡的。
3.PTEN的敲除削弱了HQ诱导的细胞凋亡效应
为了探究PTEN是否参与了HQ诱导的Jurkat细胞凋亡过程，我们进行了基因敲除实验。敲除PTEN后，我们评估了HQ治疗的影响。结果显示，PTEN敲除削弱了HQ诱导的细胞凋亡效应（图3）。
4.HQ抑制Jurkat细胞的增殖
为了研究HQ是否影响Jurkat细胞的增殖，我们进行了MTT实验。结果显示，HQ处理可以显著抑制Jurkat细胞的增殖，而这种效应也是剂量依赖性的（图4）。
Discussion
细胞凋亡作为一种自然的细胞死亡方式，是一种非常重要的生物学现象。过多的细胞增殖和寿命的延长使得细胞处于一个恶性循环状态，进而导致多种疾病的发生。因此，诱导细胞凋亡已成为治疗癌症等疾病的一种关键策略。在本研究中，我们证明了HQ能够诱导Jurkat细胞凋亡，并发现这种效应是剂量依赖性的。此外，我们补充了外源性IGF1，发现其可以逆转HQ诱导的细胞凋亡。这说明，HQ通过调节细胞因子信号通路来发挥其抗