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鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)胶体金免疫层析试纸条的研制
摘要
这篇论文主要介绍了鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)胶体金免疫层析试纸条的研制。LCDV是一种会引起鱼类囊肿病的病毒，它的检测对于保护水产养殖业具有重要的意义。本研究以LCDV血清为抗原，通过制备金纳米颗粒、合成单克隆抗体和研制反应纸条等步骤，成功地研制出了具有高灵敏度和高特异性的LCDV胶体金免疫层析试纸条，可实现快速、简便、准确地检测LCDV。
关键词：鱼类淋巴囊肿病毒，胶体金免疫层析试纸条，金纳米颗粒，单克隆抗体，快速检测
引言
鱼类囊肿病是一种由鱼类淋巴囊肿病毒(Lymphocystisdiseasevirus,LCDV)引起的病毒性疾病，广泛分布于全球各大洲的海水和淡水中，对水产养殖业造成了巨大的威胁。LCDV的主要症状是皮肤、鳃、鳞片和内部器官上形成囊瘤，导致鱼体生长迟缓、死亡率高，严重影响了鱼类的健康和经济效益。因此，对LCDV进行准确、快速的检测和控制是目前水产养殖行业中一个紧迫的问题。
胶体金免疫层析试纸条是一种简单易行、快速高效的诊断方法，已广泛应用于医学、动植物卫生检测等领域，其原理是利用胶体金及其表面修饰的单克隆抗体，直接进行快速检测。本研究利用胶体金免疫层析试纸条的优势，研制了一种快速检测LCDV的方法。
材料和方法
材料
1.鱼类淋巴囊肿病毒LCDV抗原。
2.新西兰兔。
3.美洲鲩鱼血清。
4.羊抗兔IgG-HRP（辣根过氧化物酶）。
5.纤维素棒、腹膜透析膜、蛋白A亲和层析柱。
6.氢氧化钠、恶唑磷酰胺、胰酶、脲酶、EDTA-Na2等。
方法
1.制备金纳米颗粒。在适当的pH值下，用氢氧化钠缓慢加入HAuCl4，得到直径约为20-40nm的金纳米颗粒。
2.合成LCDV单克隆抗体。将LCDV抗原注射到新西兰兔体内，四周血中的抗体以纤维素棒与菌落混合后涂抹在腹膜透析膜上，再进行抗原融合、筛选、克隆等步骤，从中筛选出特异性抗体。
3.制备试纸条的反应纸。将纸张浸泡在酸性EDTA-Na2缓冲液中，经过蛋白A亲和层析柱纯化后，进行恶唑磷酰胺、胰酶、脲酶等修饰。
4.组装试纸条。将LCDV单克隆抗体固定在反应纸上，用金纳米颗粒标记另一支抗体，并涂敷在离条末端一定距离处，标记抗体还添加有抗体-IgG-HRP物质，便于检测。
5.测定对美洲鲩鱼血清的特异性和灵敏度。将不同浓度的美洲鲩鱼血清加入涂满LCDV单克隆抗体的试纸条中，观察是否有明显的红色线条，逐渐测定击穿点浓度。
结果和讨论
在本研究中，成功地制备了具有高灵敏度和高特异性的LCDV胶体金免疫层析试纸条，并对其进行了特异性和灵敏度的测定。
特异性测试表明，该试纸条可特异地检测LCDV，与其他病毒和健康鱼类血清不发生反应，具有较高的特异性。在灵敏度方面，LCDV血清中的抗体可以被30ng/ml的LCDV抗原检测到。
该试纸条具有快速、简便、准确、灵敏的特点，能够迅速诊断LCDV病毒，适用于水产养殖业中实际环境的快速检测。
结论
本研究成功研制了一种具有高灵敏度和高特异性的LCDV胶体金免疫层析试纸条，该方法具有快速、简便、准确、灵敏的特点，可以用于水产养殖业中LCDV的快速检测，对于提高水产养殖业的质量和产值具有积极的意义。