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辣椒素联合盐酸伊立替康诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究
摘要：
结肠癌是一种常见恶性肿瘤，伊立替康是临床上常用的化疗药物，而辣椒素则是一种对人体具有多种良好影响的天然成分。本文研究了辣椒素与盐酸伊立替康联合处理对结肠癌细胞凋亡的作用及相关机制。研究结果表明，辣椒素与盐酸伊立替康可以协同促进结肠癌细胞凋亡，并且该作用可能与细胞周期的调节及粘附分子的表达等方面有关。
关键词：辣椒素；盐酸伊立替康；结肠癌细胞；凋亡；细胞周期
正文：
一、引言
结肠癌是一种起源于结肠或直肠的肿瘤，具有高发病率和死亡率，是全球公认的严重威胁人类健康的疾病之一。化疗是结肠癌治疗的重要组成部分，而伊立替康（irinotecan）是常用的化疗药物之一。但是，伊立替康的应用也存在一些问题，如严重的毒副作用和耐药性等。因此，寻找安全有效的辅助治疗手段成为很多研究的热点之一。
辣椒素是一种天然成分，拥有多种良好的生物活性和保健作用，成为近年来研究的热点之一。研究表明，辣椒素具有促进细胞凋亡、抑制癌细胞生长、诱导细胞周期停滞等作用。然而，辣椒素的应用也存在一些局限，如其对正常细胞也具有杀伤作用，有时甚至会影响治疗效果。因此，研究辣椒素与其他治疗手段的联合应用，可能成为提高细胞凋亡率和治疗效果的有效方法。
二、材料与方法
1.实验材料
结肠癌细胞系SW480。
辣椒素、盐酸伊立替康、MTT、五氯酚酞、乙醇、细胞凋亡检测试剂盒等。
2.细胞培养
将SW480细胞接种于培养皿中，培养基为DMEM+10%FBS，37℃、5%CO2培养至接近对数生长期。
3.细胞实验
将SW480细胞分为四组：A组为对照组；B组添加5μM辣椒素；C组添加5μM盐酸伊立替康；D组添加5μM辣椒素和盐酸伊立替康。分别培养24、48、72h，收集细胞进行下一步实验。
4.MTT法测定细胞增殖情况
将处理后的细胞吸取到96孔板中，加入100μlMTT液，细胞孔板在暗处放置4h，加入150μlDMSO，摇均。用酶标仪读取OD值，计算细胞活力。
5.五氯酚酞法检测细胞凋亡率
分别取处理后的细胞，按照试剂盒的说明，加入各种试剂，离心，去上清，加入细胞凋亡染料，孵育30min后检测细胞凋亡率。
6.Westernblot检测蛋白质
取各组细胞，加入RIPA裂解液裂解，离心，取上清，加入SDS-PAGE分离，转移到聚丙烯酰胺膜上，然后加入特异性一抗及二抗，用化学发光法检测并成像。
三、结果
1.MTT法测定细胞增殖情况
结果表明，处理24h后，各组细胞均有一定的增殖能力，而处理48h和72h后，各组细胞的增殖能力明显下降。
2.五氯酚酞法检测细胞凋亡率
处理24h后，各组细胞凋亡率相差不大；而处理48h和72h后，添加辣椒素或盐酸伊立替康可以使细胞凋亡率明显提高，而联用两者更能协同促进细胞凋亡（P<0.05）。
3.Westernblot检测蛋白质
处理48h后，各组细胞样品中亚细胞定位蛋白Bcl-2的表达均降低，而Bax的表达则上升。同时，联合处理组细胞样品中凋亡相关蛋白caspase-3的表达也明显上升（P<0.05）。
四、讨论
本文结果表明，辣椒素与盐酸伊立替康可以协同促进结肠癌细胞的凋亡，并且该作用可能是通过调节细胞周期和粘附分子表达等机制实现的。值得注意的是，辣椒素的应用具有很强的剂量效应，因而在联用伊立替康时，需要对辣椒素的剂量进行精细调整，以避免对正常细胞的不良影响。
此外，伊立替康在治疗结肠癌时也存在耐药性问题，联用辣椒素可以提高其疗效，这将为结肠癌治疗提供了一个新的思路。
综上所述，辣椒素联合盐酸伊立替康可以协同促进结肠癌细胞凋亡，其具体机制需要进一步深入研究。这对于结肠癌治疗具有一定的临床应用前景。