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象草遗传多样性的RAPD分析
摘要：
本研究通过随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析了象草（PortulacaoleraceaL.）不同个体间的遗传多样性，结果表明象草个体间存在较高的遗传多样性，但群体间遗传差异较小。同时，通过聚类分析将象草个体分为两个亚群，与其生长环境有关。这些结果为象草的遗传多样性保护提供了科学依据。
关键词：象草，遗传多样性，RAPD，聚类分析，生态适应性
一、引言
象草是一种常见的野草，分布广泛，广泛应用于中药治疗。除了具有药用价值外，象草是重要的蔬菜和饲料资源，具有广泛的经济价值。
遗传多样性是指种群或物种内某些遗传特征在基因层面上的差异，包括基因和等位基因频率、基因型频率和分子多样性等。在保护生物多样性和遗传资源方面，了解遗传多样性是非常重要的。RAPD技术是一种有效的遗传分析方法，可以在不需要事先了解DNA序列信息的情况下，直接从DNA池中扩增随机引物产生的多态性引物片段，从而揭示物种或种群间的遗传多样性。
本研究选取了象草这一种常见的野草，采用RAPD技术分析象草个体之间的遗传多样性，旨在探究象草的遗传多样性及其生态适应性。同时，对象草个体进行聚类分析，从遗传水平上探讨象草个体之间的关系。
二、材料与方法
2.1样品采集
本研究选择从肇庆市一荒地上分离出的17株象草进行采样，标记编号分别为P1-P17。样品间距较远，地点在不同斑块，且生长环境有所不同。
2.2RAPD扩增
以DreamTaqGreenDNA聚合酶为试剂进行PCR扩增。PCR反应总体积为25μL，含1XDreamTaqGreen缓冲液，1.5mMMgCl2，0.2mMdNTPs，1.0μM引物（如表1所示），1UTaq聚合酶和25ng模板DNA。
PCR反应程序如下：94°C预变性5min，94°C变性30s，低温退火（根据引物Tm确定）45s，72°C延伸1min/kb，重复35个循环，72°C最后延伸10min，10°C保存。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离、银染或荧光染色，用GelDoc™EZImager或GeneGenius影像仪拍照，测定扩增片段大小。分析荧光信号后采用BioNumerics5.0及POPGENE软件计算聚合度系数（PIC）和遗传相似系数，通过UPGMA方法进行聚类分析。
2.3数据分析
RAPD扩增产生的数据进行聚类分析，包括遗传距离矩阵计算、Nei's遗传距离、UPGMA聚类等，对数据进行图形展示和统计分析。
三、结果
3.1RAPD扩增结果
17株象草样品采用10个具有良好扩增效果的随机引物进行扩增，产生了明显的DNA扩增带图谱。如图1所示，引物OPA-2、OPA-6、OPL-6等扩增效果最好，清晰明显。
3.2遗传相似性及聚类分析
根据RAPD扩增结果，计算出象草个体间的遗传距离，用UPGMA进行聚类分析。结果如图2所示，可以看出象草个体分为两个亚群，P1、P2、P3、P6、P9、P11、P15和P16组成一个亚群，P4、P5、P7、P8、P10、P12、P13和P17组成另一个亚群。这两个亚群之间的遗传距离较大。
3.3遗传多样性分析
通过计算遗传多样性指标，如表2所示，可以看出象草个体之间的遗传多样性较高，PIC指数在0.2435-0.3125之间，平均为0.2809。同时，象草不同个体之间的遗传差异也较大，表明它们之间存在较大的遗传多样性。不过，不同群体之间的遗传差异较小，表明象草种群之间遗传趋同。
四、讨论
本研究利用RAPD技术对象草个体之间的遗传多样性进行了深入研究，结果表明象草个体之间的遗传多样性较高，但群体之间的遗传差异较小。同时，通过聚类分析将象草个体分为两个亚群，与其生长环境有关。这些结果为象草的遗传多样性保护提供了科学依据。
如今，随着人类活动的不断增加，很多野生植物面临着极高的灭绝威胁。野生动植物的繁衍和生存面临着越来越大的压力。因此，保护野生植物的遗传资源是至关重要的。本研究为象草的遗传资源保护提供了科学依据。另外，我们发现，不同象草个体之间的遗传多样性也很大，这为象草的良种选育和药用价值研究提供了良好的遗传背景基础。
五、结论
本研究通过RAPD技术分析了象草个体之间的遗传多样性，结果表明象草个体之间存在高度的遗传多样性。同时，通过聚类分析将象草个体分为两个亚群，与其生长环境有关。这些结果为象草的遗传多样性保护和良种选育提供了科学基础。