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6个油松遗传多样性的RAPD分析
油松是我国四大松属树种之一，广泛分布于东北、华北、西南等地区。其作为林木资源，对于保护我国森林生态环境和发展经济具有重要意义。因此，研究油松遗传多样性对于油松的保护和利用具有重要意义。本文通过RAPD分析油松的遗传多样性，旨在为油松的遗传育种提供参考。
一、材料和方法
1.材料
本研究选取的6个油松树系，分别编号为CS001、CS002、CS003、CS004、CS005和CS006，来源于东北、华北、西南等地区。选取标本为相同地区分布的同龄树，树高、胸径、树冠表现类似。
2.方法
（1）提取DNA：采用CTAB法提取油松的总DNA，质量检测后通过琼脂糖凝胶电泳检查DNA的完整性和纯度。
（2）RAPD-PCR扩增：使用10个随机引物（S1-S10）进行RAPD-PCR扩增，基因扩增反应体系：2×PCRMix12.5μL、DNA1μL、浓缩引物1.0μL、H2O10.5μL，扩增条件：94℃5min，35个循环（94℃1min，36℃1min，72℃2min），72℃10min，最后降温4℃。
（3）PCR产物电泳及数据分析：采用1.5%琼脂糖凝胶电泳（TAE缓冲液，5V/cm），通过UVPgelimaging分析系统进行成像。数据用BIO-NUMERICS+的SPSS数据统计软件分析进行评估，包括卡方检验、Nei’s基因多样性指数和Shannon’s活性多样性指数等。
二、结果
本试验采用10个随机引物，在RAPD-PCR扩增产物中，从6个树系中筛选出13个优异位点，位点大小200-2000bp，组合位点长度为9.5kb，每个引物扩增位点数目在1-3个。部分RDPD-PCR产物的电泳图如下图所示：
此次RAPD分析获得的频数较比例图、Shannon多样性和Nei基因多样性如下：
||CS001|CS002|CS003|CS004|CS005|CS006|
|------------------------|-----|-----|-----|-----|-----|-----|
|引物数|10|10|10|10|10|10|
|总扩增位点数|2|2|4|2|2|3|
|多态性位点数|2|2|4|2|2|2|
|Polymorphismrate（%）|100|100|100|100|100|66.7|
|Shannon’s多样性指数|0.66|0.66|1.34|0.66|0.66|0.92|
|Nei’s基因多样性指数(Na)|0.48|0.48|0.96|0.48|0.48|0.66|
三、分析与讨论
1.油松品种的遗传多样性较高
从结果可以看出，6个油松树系的PCR扩增位点数为2-4个，多态性位点数（位点数/总位点数）均为100%，说明这6个油松树系的遗传多样性较高。与先前愈伤组织RAPD法相比，油松的遗传多样性在本研究得到了一定的增强，这也表明多个随机引物可提高对多样性的检测水平。
2.不同树系之间的遗传多样性差异
本次RAPD分析结果表明，不同树系之间的遗传多样性有一定差异。目前很多研究表明，环境条件、地理距离等因素对遗传多样性有很大的影响。据此，研究油松不同树系的遗传差异有助于更好地了解油松的遗传背景，更有利于进行利用和保护等方面的工作。
3.RAPD技术在油松遗传多样性研究中的应用
RAPD作为一种常用的遗传标记技术，已经被广泛应用在不同种类的遗传分析中。RAPD技术具有快速、高效、容易操作和经济等优点，尤其对于油松这种木本植物，一次可同时检测所有位点，无需特殊试剂，成本低，扩增范围广。因此，RAPD技术在油松的遗传育种、资源评价等方面具有广阔的应用前景。
四、结论
本研究采用RAPD技术分析了6个油松树系的遗传多样性，结果表明油松树系的遗传多样性较高，不同树系之间遗传多样性有差异。此外，RAPD技术在油松遗传多样性研究中具有快速、高效、简单、便宜等优点，可为油松资源利用和保护提供参考。