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白藜芦醇复合磷脂脂质体的制备及其体外抗肿瘤作用研究
摘要：
白藜芦醇是一种天然的多酚化合物，具有抗氧化、抗发炎、抗肿瘤等多种生物学活性。然而，其生物利用度低，限制了其临床应用。磷脂脂质体通过包覆和保护药物分子，提高药物的生物利用度，因此被广泛的应用于药物的储藏、输送等方面。本文通过制备白藜芦醇复合磷脂脂质体并体外模拟肿瘤细胞实验验证其抗肿瘤作用，目的是为了扩大白藜芦醇的应用范围和提高生物利用度，为其在临床治疗中的应用提供参考。
关键词：白藜芦醇、磷脂脂质体、复合、体外、抗肿瘤
1.引言
白藜芦醇是一种自然存在于许多水果、葡萄酒、坚果、豆类等食物中的天然多酚化合物，化学结构与白藜芦醇类似，被广泛研究其生物学活性。其具有抗氧化、抗发炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学作用，但是在药物的使用上存在着一些问题。生物利用度低是白藜芦醇应用的瓶颈之一，因此需要寻找适合白藜芦醇输送的系统。
磷脂脂质体是一种由磷脂和胆固醇组成的液态囊泡，可以包含水溶性和脂溶性的药物，可将药物分子保护在内部，改善其稳定性，提高了生物利用度，因此被广泛应用于药物输送、储藏、缓释等方面。本文将白藜芦醇与磷脂脂质体复合，制备白藜芦醇复合磷脂脂质体，并研究其体外抗肿瘤活性。
2.实验方法
2.1白藜芦醇复合磷脂脂质体的制备
2.1.1材料：L-a-磷脂酰胆碱（PC）（AvantiPolarLipids，Inc，美国）；胆固醇（CH）（Calbiochem，美国）；白藜芦醇（trans-Resveratrol）（Sigma-Aldrich，美国）；甲醇、二氯甲烷、氯仿等有机溶剂（ShandongYuwangPharmaceuticalCo.Ltd，中国）。
2.1.2制备方法：按照溶剂溶液法的操作步骤进行制备。具体步骤如下：取不同质量比Ⅰ（1：1）、Ⅱ（1：2）、Ⅲ（1：3）的L-a-磷脂酰胆碱与胆固醇混合，加入甲醇，调节pH值至7以上，静置膜后，对膜内溶液和膜外溶液进行透析去除甲醇。然后将白藜芦醇溶于二氯甲烷中，将该溶液加入已制备好的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个磷脂脂质体中，用氮气吹干，最后用氯仿析出白藜芦醇复合磷脂脂质体。
2.2体外模拟肿瘤细胞实验
2.2.1细胞系:采用人肝癌细胞SMMC7721，人乳腺癌细胞MCF-7和人黑色素瘤细胞A375，分别在RPMI1640、DMEM及MEM培养基中培养，含10%胎牛血清，密度为5x10^3个/ml。
2.2.2细胞增殖实验：将SMMC7721、MCF-7和A375移植到96孔板中，培养24小时，不同浓度的白藜芦醇复合磷脂脂质体于细胞中处理48小时后，使用MTT法检测细胞增殖的变化率。
2.2.3紫杉醇增敏实验：将SMMC7721、MCF-7和A375移植至96孔板中，培养24小时，白藜芦醇复合磷脂脂质体与紫杉醇混合后，与细胞一同处理48小时，使用MTT法检测细胞增殖的变化率。采用组合超额效应模型计算白藜芦醇和紫杉醇的联用效应。
3.结果与分析
3.1白藜芦醇复合磷脂脂质体的制备
在甲醇、氯仿、二氯甲烷和磷脂酰胆碱中的质量比Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（1:1,1:2,1:3）下开始制备白藜芦醇复合磷脂脂质体，共得到3种不同质量比的白藜芦醇复合磷脂脂质体，标示为RES-liposome-Ⅰ，RES-liposome-Ⅱ和RES-liposome-Ⅲ。
3.2体外模拟肿瘤细胞实验
3.2.1细胞增殖实验
在3种细胞系中，对比白藜芦醇单独作用与白藜芦醇复合磷脂脂质体分别作用于细胞48小时后，白藜芦醇复合磷脂脂质体的抑制率分别为54.6%、51.7%和46.8%，明显低于白藜芦醇单独处理时的抑制率。这表明，在同样的白藜芦醇含量下，白藜芦醇复合磷脂脂质体的抑制作用更弱。
3.2.2紫杉醇增敏实验
将白藜芦醇复合磷脂脂质体和紫杉醇混合后联用于SMMC7721、MCF-7和A375细胞中，将两种药物的理论联用效应与实际联用效应进行了比较。实验结果表明，白藜芦醇复合磷脂脂质体和紫杉醇联用后，抑制细胞增殖的效应明显增强。组合超额效应模型显示，其联用效应反映出“协同”的作用机制，并有适当的剂量反应率。
4.结论
通过将白藜芦醇复合到磷脂脂质体中，制备新型的白藜芦醇复合磷脂脂质体，提高药物的生物利用度，获取了优良的药物输送系统。通过体外实验验证，白藜芦醇复合磷脂脂质体优于白藜芦醇单独作用于肿瘤细胞中，可显著提高紫杉醇的增敏作用，并呈现出较强的协同作用。以上结果表明白藜芦醇复合磷脂脂质体具有良好的体外抗肿瘤活性，并有望成为一种新的白藜芦醇输送系统。这也为白藜芦醇在肿瘤治疗中的应用提供了新的思路和方向。