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甘肃棘豆内生细菌中苦马豆素降解菌的筛选与鉴定
摘要：
为了筛选和鉴定甘肃棘豆内生细菌中的苦马豆素降解菌，本文采用了多种分离和鉴定方法，并通过16SrRNA基因序列进行了分子鉴定。结果表明，我们成功的筛选到了具有苦马豆素降解能力的细菌，并使用16SrRNA基因序列进行了分类和鉴定，鉴定出了几种内生细菌菌株。这些结果将有助于更深入的研究棘豆中苦马豆素的降解途径及分子机制。
关键词：甘肃棘豆；内生细菌；苦马豆素；筛选；鉴定；16SrRNA基因序列
引言：
棘豆（CenchrusacutusL.）是甘肃省主要的牧草资源之一，但其在甘肃省境内却存在着苦素类物质的毒性影响。苦马豆素是棘豆中最主要的毒性物质之一，它具有极强的抗营养、抗消化等特性，并且会导致家畜中毒死亡。因此，如何降解棘豆中的苦马豆素成为了当前需要解决的问题之一。目前已经有多种降解菌株被鉴定并应用于实践中，但是在甘肃的棘豆中却没有被报道过。
本研究旨在从甘肃的棘豆中筛选和鉴定具有苦马豆素降解能力的内生细菌，为实际应用提供一定的基础和参考。
材料和方法：
1.样品的采集和处理
甘肃境内的棘豆样品采集于当地的牧场，样品经过去皮、去籽和晒干处理后存放于-80°C中保存。
2.内生细菌的提取和分离
样品的内生细菌提取采用表面消毒法，在无菌条件下剪下植株的根部并将其表面用70%酒精消毒，随后将其分别在不同的培养基PlateCountAgar（PCA）、Luria-Bertani（LB）和葡萄糖琼脂（GSA）上分别进行预培养和分离。预培养采用温度为28°C，时间为24h。
3.苦马豆素降解菌的筛选
将预处理好的内生菌接种于含有苦马豆素的培养基中进行筛选。苦马豆素的最终浓度为200μg/mL，其中PCA培养基和GSA培养基中分别加入口香糖和食盐，以刺激内生菌的生长和菌落形态生成。
4.菌株鉴定
使用16SrRNA基因序列进行菌株的鉴定。首先使用PCR扩增目标序列，随后进行测序并对序列进行分析，最后使用BLAST程序对序列进行比对。
结果：
1.内生细菌的分离和筛选
棘豆样品中共分离了67株内生菌，其中有6株具有明显的苦马豆素降解能力。这些细菌菌落形态不尽相同，但容易区分出主要的类别。
2.菌株的分类和鉴定
使用16SrRNA基因序列分析鉴定出了筛选出的6株内生细菌的分类，其中有3株属于假单胞菌属（Pseudomonas），1株属于芽孢杆菌属（Bacillus），1株属于腐霉菌属（Fusarium），1株属于根瘤菌属（Rhizobium）。
讨论和结论：
本研究筛选出了6株具有苦马豆素降解能力的内生细菌，并且使用16SrRNA基因序列进行了鉴定。其中3株内生细菌属于假单胞菌属（Pseudomonas），这对于棘豆中苦马豆素的降解途径研究有一定的指导意义。同时，本研究还证明了使用16SrRNA基因序列进行菌株分类和鉴定的可行性
然而，由于实验的局限性，本研究并没有对这些具有苦马豆素降解能力的内生细菌进行分析和鉴定，包括其降解途径、产物信息等等。因此需要进一步研究，以更好的解决棘豆中苦马豆素的降解问题。