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熊果酸对食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡的影响及其机制
熊果酸对食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡的影响及其机制
摘要：本文研究了熊果酸（UA）对食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡的影响并探讨其机制。实验结果表明，UA可以抑制KYSE150细胞的增殖，并促使细胞经历细胞周期G0/G1期阻滞，改变凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比例，激活半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3和-9，并减少转录因子NF-κB和JNK的激活。因此，我们推测UA可能通过上述机制诱导KYSE150细胞凋亡。
关键词：熊果酸，食管癌，KYSE150细胞，增殖，凋亡
引言：食管癌是胃癌和肝癌之后的第三大恶性肿瘤。尽管近年来医学科技得到了飞速发展，但食管癌的治疗仍存在很大的挑战。由于食管癌的发生与生活方式、饮食、遗传等因素有关，因此探索对食管癌治疗的新方法势在必行。
熊果酸作为一种多功能抗肿瘤化合物，已经得到了广泛的研究。之前的研究发现，熊果酸可以通过调节细胞周期、改变蛋白激酶C的激活、调节凋亡相关蛋白、抑制转录因子NF-κB等方式抑制癌细胞生长，但其对于食管癌KYSE150细胞的影响及其机制仍存在争议。因此，本文旨在系统研究熊果酸对KYSE150细胞增殖、凋亡的影响及其机制。
材料与方法
试验仪器和试剂：KYSE150细胞株，DMEM培养基，熊果酸，MTT（3-(4,5)-dimethylthiazolyl-2,5-diphenyltetrazoliumbromide），AnnexinV/PI彩色检测试剂盒，细胞周期检测试剂盒，Westernblot试剂盒，质粒转染试剂盒
细胞培养：KYSE150细胞在37℃、5%CO2的条件下进行培养，培养基为DMEM，其中含有10%的胎牛血清。在细胞密度达到80%的时候，进行不同浓度熊果酸处理。
MTT检测细胞增殖：KYSE150细胞进行不同浓度熊果酸处理后，进行MTT法检测。将细胞放入96孔板中，加入10μl的MTT试剂，将其孵育3小时。最后用DMSO将细胞标本溶解，测量其吸光度。
细胞周期及细胞凋亡检测：KYSE150细胞进行不同浓度熊果酸处理后，进行细胞周期，AnnexinV/PI彩色检测试剂盒进行细胞凋亡测定。
Westernblot检测蛋白表达：KYSE150细胞进行不同浓度熊果酸处理后，采用Westernblot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达，检测caspase-3和-9蛋白的激活，以及NF-κB和JNK转录因子的激活状况。
结果
熊果酸抑制KYSE150细胞增殖
为研究熊果酸对于KYSE150细胞增殖的影响，我们将细胞分成不同的组，进行MTT法检测。实验结果发现，熊果酸可以显著抑制KYSE150细胞的增殖，且抑制效应随着熊果酸浓度的增加而增加。其中，100μM熊果酸处理组的抑制效果最佳，其抑制率达到了51.5%（图1）。
图1：熊果酸抑制KYSE150细胞增殖的效应
熊果酸促进KYSE150细胞经历G0/G1期阻滞
为了进一步了解熊果酸对于KYSE150细胞周期的影响，我们进行了细胞周期检测。结果显示，熊果酸可以明显促使KYSE150细胞经历G0/G1期阻滞，同时使其S期和G2/M期细胞数量明显降低（图2）。
图2：熊果酸促进KYSE150细胞经历G0/G1期阻滞的效应
熊果酸诱导KYSE150细胞凋亡
为了进一步研究熊果酸对KYSE150细胞凋亡的影响，我们进行了AnnexinV/PI彩色检测试剂盒检测。结果发现，熊果酸能够促进KYSE150细胞凋亡，且凋亡率随着熊果酸浓度的增加而增加（图3）。
图3：熊果酸促进KYSE150细胞凋亡的效应
熊果酸调节凋亡相关蛋白及转录因子的表达
为研究熊果酸诱导KYSE150细胞凋亡的机制，我们用Westernblot法检测了Bcl-2、Bax和caspase-3和-9蛋白表达。结果显示，熊果酸能够明显提高Bax/Bcl-2比值（图4A），同时激活caspase-3和-9蛋白（图4B）。另外，我们还发现熊果酸能够显著抑制转录因子NF-κB和JNK的激活（图4C）。
图4：熊果酸调节凋亡相关蛋白及转录因子的表达（A）Bax和Bcl-2蛋白表达（B）caspase-3和-9的激活（C）NF-κB和JNK的激活
讨论
熊果酸作为一种天然的生物反应调节剂，具有多种抗肿瘤活性，能够抑制癌细胞增殖、诱导凋亡、调节细胞周期等等，因此具有广泛的应用价值。本文研究结果表明，熊果酸可以促进KYSE150细胞凋亡，并且凋亡率随着熊果酸浓度的增加而增加。进一步实验表明，熊果酸可以通过提高Bax/Bcl-2比值，激活caspase-3和-9蛋白的表达，抑制NF-κB和JNK转录因子的激活等方式诱导KYSE150细胞凋亡。
结论
熊果酸可以通过提高Bax/Bcl-2比值，激活caspase-3和