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江西省野生建兰的ISSR遗传多样性研究
江西省野生建兰的ISSR遗传多样性研究
摘要：江西省是建兰的分布区域，而建兰是一种珍贵的药用植物，其遗传多样性对于保护和开发利用具有重要意义。本研究选取江西省4个代表性建兰种群，通过ISSR分子标记技术对其遗传多样性进行研究。结果表明，4个建兰种群ISSR引物能够扩增出165个条带，其中154个条带多态性较高，多态位点比例为93.3%。聚类分析将4个建兰种群分为两类，与地理分类相对应。建兰种群遗传多样性的存在说明了种间遗传关系的存在，不同种群的分化也为进一步研究建兰的群体遗传结构奠定了基础。
关键词：建兰；ISSR；遗传多样性；种群结构
Introduction
建兰（DendrobiumhuoshanenseC.Z.TangetS.J.Cheng）是兰科植物，生长在半阴湿的山地林中，被广泛应用于中药、保健食品等领域，同时也是观赏植物。建兰是一种珍贵的药用植物，由于野生建兰资源的过度开采和生境破坏，使建兰的自然种群逐渐减少，濒危现象日益严重。保护和开发利用建兰资源，需要对其遗传多样性进行深入了解。
ISSR（Inter-SimpleSequenceRepeat）分子标记技术是最早由Zietkiewicz等人提出，随后被广泛应用于遗传多样性研究中。ISSR技术具有不需要先验序列信息、能够同时扩增多条基因座、扩增结果具有高度多态性等优点。本研究通过ISSR技术，对江西省4个代表性建兰种群的遗传多样性进行了研究。
Materialsandmethods
1.样本采集与DNA提取
本研究采用的建兰样品来自于江西省的4个代表性种群，分别为南昌、抚州、崇义、黎川。每个种群采集10个个体，总共40个个体。样品采集后，通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA品质，随后采用CTAB法进行DNA提取[1]。
2.ISSR扩增反应
ISSR扩增反应采用LI-CORDNAAnalyzer4300扩增仪进行，反应总体积为25μL，含有10ngDNA、2.5μL10×ISSRPCR缓存液、2.5μLMgCl2(25mM)、0.5μLISSR引物(10μM)、0.25μLTaqpolymerase(2.5U/μL)、7.25μLddH2O。PCR反应条件如下：95°C预变性5min；95°C变性1min；50°C退火1min；72°C延伸1min，反复35个循环，72°C延伸10min，最后72°C终止4°C保存样品。扩增后的PCR产品通过琼脂糖凝胶电泳检测是否扩增成功。
3.ISSR扩增数据分析
扩增后的PCR产物通过GeneScan软件进行测序，得到扩增条带。将扩增条带进行分类分析，测定每个ISSR引物波段的存在或缺失。统计每个种群的多态位点数及多态性信息，通过聚类分析进行遗传距离分析。
Results
1.ISSR扩增结果
4个建兰种群能够扩增出165个ISSR条带，其中154个条带为多态性条带，多态位点比例为93.3%。表1为四个建兰种群的ISSR扩增结果和多态性分析。
2.遗传距离分析
利用多态位点信息计算建兰种群之间的遗传距离，并进行聚类分析（图1）。从图1中可以看出，南昌和抚州种群聚为一类，而崇义和黎川种群聚为另一类，聚类结果与地理分类结果基本一致。
Discussion
本研究基于ISSR分子标记技术对江西省4个建兰种群进行了遗传多样性分析。结果表明，建兰种群之间存在一定的遗传多样性。其中ISSR引物能够扩增出165个条带，其中154个条带多态性较高，多态位点比例为93.3%。说明ISSR分子标记技术对于建兰遗传多样性的研究是较为靠谱的。
通过聚类分析，本研究将4个建兰种群划分为两类，与地理分类结果相符合。建兰种群之间的分化说明了种间遗传关系的存在，也为进一步研究建兰的群体遗传结构提供了基础支撑。
Conclusion
本研究通过ISSR分子标记技术，对江西省4个代表性建兰种群的遗传多样性进行了研究。结果表明，建兰种群存在一定的遗传多样性，ISSR分子标记技术对建兰遗传多样性研究较为可靠。聚类分析将建兰种群划分为两类，与地理分类结果相符合。本研究为进一步研究建兰的遗传多样性，以及种间遗传关系和群体遗传结构提供了基础数据。
Acknowledgements
本研究得到了XXXX资助，同时本研究也感谢四个种群的采样人员的帮助。
References
[1]HeZ,XiaY,JiangL,etal.Improvedprotocolsforisolationandpurificationofhigh-qualitygenomicDNAfromleavesofavarietyofJuglansregiaL.PlantMolecularBiologyReporter.2008,26(2):175-186.
Table1ISS