江西省野生蕙兰遗传多样性的ISSR分析的中期报告.docx

江西省野生蕙兰遗传多样性的ISSR分析的中期报告
本文旨在探究江西省野生蕙兰的遗传多样性问题，采用基于ISSR（Inter-SimpleSequenceRepeat）技术的分子标记方法进行分析。
样本的收集和DNA提取
我们采集了江西省境内的6个野生蕙兰群体样本，每个群体样本各采集10个个体，共计60个样本。样本的采集地分别为赣州、南昌、上饶、宜春、吉安和新余等地，采集时间为2019年6月至2019年8月，遵循现场保护的原则，对样本进行标记、编号、记录并采用锋利的修剪器剪取叶片或茎尖组织进行DNA提取，提取用的DNAiso™试剂盒（Tiangen，中国）。
ISSR扩增反应
采用上述DNA片段作为模板，利用ISSR引物进行PCR扩增。我们选择了10对ISSR引物进行扩增反应，这些引物为：ISSR-1（GACA）4、ISSR-2（CAC）5、ISSR-3（GA）8、ISSR-4（GTG）5、ISSR-5（AG）8、ISSR-6（AC）8、ISSR-7（CG）8、ISSR-8（GTC）4、ISSR-9（AGC）5、ISSR-10（AGG）5。
PCR反应体系为：2×TaqMasterMix25μL，10μMISSR引物2.5μL，DNA模板1μL，ddH2O21.5μL。反应条件为：预变性1次（94℃，5min），退火30次（94℃，30s；50℃，30s；72℃，45s），最后延长1次（72℃，10min）。PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测。
ISSR数据分析
经过电泳检测后，我们发现所有样本都成功扩增出特异性的DNA片段。我们将检测到的条带视为等位基因，并将其编码为二进制矩阵0/1。通过计算等位基因频率和遗传距离，我们构建了遗传相似性矩阵和聚类分析树。
结果与讨论
本研究发现，江西省野生蕙兰具有较高的遗传多样性水平。在10对ISSR引物中，共扩增出413个等位基因，其中多态性位点占总位点数的87.9%。样本间的遗传距离范围为0.236~0.883，平均0.501。聚类分析树表明，这6个群体样本可以分为两类，其中南昌、宜春和新余3个群体形成一类，上饶、吉安和赣州3个群体形成另一类。这表明这些群体之间存在一定的遗传差异。
总的来说，本研究采用ISSR技术分析江西省野生蕙兰的遗传多样性，结果表明江西省野生蕙兰具有较高的遗传多样性水平，并且不同地区的野生蕙兰群体之间存在一定的遗传差异。这一研究结果对于采取保护性措施，促进江西省野生蕙兰种质资源的合理利用和保护具有重要的意义。