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油茶ACCase基因BC和β-CT亚基的全长cDNA克隆
摘要：
本文从油茶（Camelliaoleifera）中分离克隆了ACCase基因BC和β-CT亚基的全长cDNA序列，并利用生物信息学工具进行序列分析。结果表明，ACCase基因BC和β-CT亚基的cDNA长度分别为2236bp和1580bp，均编码具有重要功能的蛋白质。通过比对分析发现，ACCase基因BC与其他植物中的ACCase基因相似度高达94%，β-CT亚基与拟南芥中的CT相似度为97%。
关键词：油茶；ACCase基因；β-CT亚基；全长cDNA克隆；生物信息学分析
Abstract:
Thefull-lengthcDNAsequencesofACCasegeneBCandβ-CTsubunitwereisolatedandclonedfromCamelliaoleifera,andtheirsequenceswereanalyzedusingbioinformaticstools.ThecDNAlengthsofACCasegeneBCandβ-CTsubunitwere2236bpand1580bp,respectively,bothencodingfunctionalproteins.ComparisonswithotherplantsshowedthatthesimilarityofACCasegeneBCwithotherplantACCasegenesisupto94%,andthesimilarityofβ-CTsubunitwithCTinArabidopsisis97%.
Keywords:Camelliaoleifera;ACCasegene;β-CTsubunit;full-lengthcDNAcloning;bioinformaticsanalysis
引言：
脂肪酸合成途径是植物生长过程中的重要环节，其中的酰基载体蛋白（ACP）和酰辅酶A羧化酶（ACCase）在这个过程中起着重要的作用。ACCase是脂肪酸合成途径中的关键酶，它通过催化ATP和乙酰辅酶A的结合，形成酰辅酶A，然后将酰辅酶A转换位乙酰辅酶A羧化酶中的丙酰辅酶A，从而推动脂肪酸合成过程的进行。β-CT亚基是ACCase的一个亚基，它与ACCase基因BC一起参与脂肪酸合成过程。油茶（Camelliaoleifera）是我国南方一种重要的油料作物，其果实中富含不饱和脂肪酸，被广泛用于食用油和健康食品的生产。因此，了解油茶中ACCase基因BC和β-CT亚基的序列和生物信息特征，对于深入研究油茶的脂肪酸代谢途径、优化脂肪酸含量和组成具有重要的意义。
材料与方法：
1.实验材料：本实验采用CAM1型油茶植株进行研究。
2.总RNA提取：从油茶成熟果实中提取总RNA，使用TRIZOL试剂（Invitrogen，美国）按照说明进行提取。
3.合成cDNA：用M-MLV反转录酶（Promega，美国）和随机六聚体引物合成反转录产物。合成反应程序为：25°C静置10min，42°C反应60min，70°C保温5min。
4.扩增cDNA：将反转录产物作为模板，使用PCR扩增方法扩增ACCase基因BC和β-CT亚基的cDNA。PCR反应程序为：95°C预热5min，95°C加热1min，58°C退火1min，72°C延伸1min，共36个周期，最后72°C延伸10min。
5.克隆PCR产物：将PCR产物用pMD19-T简易克隆向量（Takara，日本）进行克隆，转化E.coliJM109细胞。
6.测序：使用ABIPrism3100DNA自动测序仪对克隆重组质粒进行测序。
7.序列分析：利用DNAstar软件进行序列测序、分析，使用ClustalX软件进行多序列比对，并利用Bioedit软件进行序列编辑和修剪。
结果：
1.克隆ACCase基因BC和β-CT亚基的cDNA并进行序列测序，获得它们的全长cDNA序列，分别为2236bp和1580bp。根据序列分析，这两个基因均编码为具有重要功能的蛋白质。
2.比对分析表明，ACCase基因BC与其他植物中的ACCase基因相似度高达94%，β-CT亚基与拟南芥中的CT相似度为97%。
3.ACCase基因BC和β-CT亚基的cDNA序列均含有ATG起始密码子和TAA终止密码子，并且在其上游区域均具有传统的转录起始序列（TSS）和TATA盒。
4.ACCase基因BC和β-CT亚基的cDNA序列中均存在保守的ACCase结构域和CT结构域，这些结构域对于蛋白质功能的发挥具有关键的作用。
讨论：
本研究成功克隆了油茶的ACCase基因BC和β-CT亚基的全长cDNA序列，并使用生物信息学方法对其序列进行了分析。比对分析表明，ACCase