油茶β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA克隆的任务书.docx

油茶β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA克隆的任务书
任务书
题目：油茶β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA克隆
一、研究背景
油茶是一种重要的油料和食用植物，其种子中含有丰富的油酸和不饱和脂肪酸，对人体健康有益。β-酮脂酰-COA合酶是油茶种子中三羧酸循环中的重要酶，参与棕榈酸和油酸的合成。目前，关于油茶β-酮脂酰-COA合酶的研究还相对较少，对其分子结构和功能的认识尚不够充分。因此，克隆油茶β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA，可以进一步深入研究其分子机制，为油茶的品种改良和开发提供科学依据。
二、研究目的
1.通过PCR扩增和RACE技术，克隆油茶β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA序列；
2.进行生物信息学分析，包括物种比对、进化分析、基因结构、启动子分析等；
3.进行原核表达和体外拷贝数分析，评测克隆所得cDNA的功能。
三、研究方法
1.材料准备：油茶种子；
2.提取RNA：从幼苗或种子中分别取5g样品，加入20mLTRIzol，快速几下颠倒，加入20%SDS溶液，混合彻底后将混合物倒入RNAse-free离心管中，转动混匀。70℃离心10min后，上清转移到2mLRNAase-free离心管中，加入1/2体积的丙酮，冷藏15min或超过30min，将上清离心15min，将上清转移到新的RNAase-free离心管中，加入1mL75%酒精沉淀RNA，冷藏30min，离心15min，将沉淀用DEPC处理后的75%酒精洗涤一次，重复此步骤2次，最后使用RNase-free水重溶RNA；
3.反转录合成cDNA：采用PrimeScriptRTreagentKit(PerfectRealTime)将所得RNA反转录为cDNA；
4.PCR扩增和RACE技术：根据已有的部分基因序列设计特异引物，扩增出β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA序列；
5.克隆和测序：将PCR和RACE产物克隆入适当载体中进行转化，筛选出正常重组质粒进行测序；
6.生物信息学分析：物种比对、进化分析、基因结构、启动子分析等；
7.原核表达和体外拷贝数分析：将所得cDNA序列克隆入适当的表达载体中进行原核表达，并通过分析拷贝数来确定克隆所得cDNA的功能。
四、研究进度安排
1.第一周：采集油茶种子，进行RNA提取；
2.第二周：进行反转录合成cDNA；
3.第三周：设计引物，进行PCR扩增和RACE技术；
4.第四周：克隆PCR和RACE产物，并进行测序；
5.第五周：进行生物信息学分析；
6.第六周：将cDNA序列克隆入适当的表达载体中进行原核表达，并分析拷贝数。
五、预期成果
1.克隆出油茶β-酮脂酰-COA合酶基因的全长CDNA序列；
2.进行生物信息学分析，了解该基因的分子结构和功能；
3.通过原核表达和体外拷贝数分析，评价克隆所得cDNA的功能。