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油橄榄叶中羟基酪醇的提取纯化及抗氧化性研究
摘要
本文主要研究了油橄榄叶中羟基酪醇(HY)的提取和纯化过程，利用超高效液相色谱和质谱仪对提取得到的HY进行鉴定。同时运用DPPH自由基清除实验和还原力测定，研究了HY的抗氧化性能。实验结果表明，采用75%乙醇提取，MCI天然大孔吸附树脂纯化可以获得高纯度的HY；HY具有较强的自由基清除活性和一定的还原能力。本研究对油橄榄叶中羟基酪醇的深化了解以及其在保健品、食品添加剂和药物领域的应用具有一定的参考价值。
关键词：油橄榄叶；羟基酪醇；提取纯化；抗氧化性
Abstract
Thisstudyinvestigatedtheextractionandpurificationprocessofhydroxytyrosol(HY)fromoliveleaves,andidentifiedHYusingultra-highperformanceliquidchromatographyandmassspectrometer.Meanwhile,theantioxidantpropertiesofHYwerestudiedusingDPPHradicalscavengingassayandreducingpowerdetermination.Theresultsshowedthat75%ethanolextractionandMCInaturalmacroporousadsorptionresinpurificationcouldobtainhigh-purityHY;HYhadstrongfreeradicalscavengingactivityandcertainreducingpower.Thisstudyhasacertainreferencevaluefordeeperunderstandingofhydroxytyrosolinoliveleavesanditsapplicationinhealthproducts,foodadditives,andpharmaceuticalfields.
Keywords:oliveleaf;hydroxytyrosol;extractionandpurification;antioxidantproperties
引言
近年来，由于氧化损伤在人体疾病中的关键作用，越来越多的研究工作聚焦于天然抗氧化物的发现和研究。油橄榄(oleaeuropaeaL.)是一种古老的果树，其果实、叶子、枝干等各部分都富含多种生物活性成分，尤其是其叶子含有较高的羟基酪醇(HY)。HY具有抗氧化、抗癌、抗炎等生物活性，常被作为保健品、食品添加剂和药物的原料。因此，提取和研究油橄榄叶中的HY有重要的研究意义。
本研究旨在采用75%乙醇提取油橄榄叶中的HY，利用MCI天然大孔吸附树脂进行纯化，探究其在DPPH自由基清除和还原力实验中的抗氧化性能。
材料与方法
1.实验材料
油橄榄叶：来源于山东省滕州市农村地区。
75%乙醇、甲醇、氯仿、苯乙酸、水：均为优级分析纯；
MCI天然大孔吸附树脂：摩尔比为1∶1，糖苷型，Supelco公司，美国；
DPPH自由基、铁离子：均为优级分析纯；
还原型谷胱甘肽(Reducedglutathione,GSH)、5,5'-二硫化二（2-硝基苯酚）酸(DTNB)：均为生化试剂分析级，国产。
2.实验方法
2.1油橄榄叶中HY的提取与纯化
采用75%乙醇提取法提取油橄榄叶中的HY，提取液进行浓缩，通过挥发性物质去除残留的乙醇并使用MCI天然大孔吸附树脂进行纯化。通过色谱法及观察法检验HY的纯度。
2.2油橄榄叶中HY的鉴定
采用超高效液相色谱-高分辨质谱（Ultraperformanceliquidchromatography-massspectrometry,UPLC/MS）方法对油橄榄叶提取物的主要成分进行鉴定，同时利用UV-Vis光谱法对HY的特征吸收峰进行检测。
2.3HY的抗氧化性能测定
2.3.1DPPH自由基清除实验
采用DPPH自由基清除实验，其具体步骤如下：
将5ml的0.1mMDPPH乙醇溶液加入1ml不同浓度的HY溶液中，经停止转子浸泡15min后，采用分光光度计测定溶液ABS值，不添加HY溶液作为对照组。实验组自由基清除率的计算公式为：
DPPH清除率（%）=[(A0-A1)/A0]×100
其中，A0表示DPPH自由基乙醇溶液的吸光度，A1表示添加不同浓度的HY后DPPH自由基乙醇溶液的吸光度。
2.3.2还原能力测定
采用还原力实验，其具体步骤如下：
将0.2ml的HY溶液分别与1ml50mM磷酸盐缓冲液(pH=6.6)、1ml铁离子(1%)、1mlDTNB（0.2%）混合，经过15min的反应后，分别加入0.2ml还原