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抑制PRR11表达对细胞增殖及迁移侵袭能力的影响及其分子机制研究
摘要
PRR11(Proline-richprotein11)是一种新的tumorsuppressorgene，其在多种肿瘤细胞中有着抑制细胞增殖及侵袭的作用。本研究利用多种实验方法探讨了抑制PRR11表达对人乳腺癌MCF-7细胞系细胞增殖及迁移侵袭能力的影响，明确了分子机制，为进一步探索PRR11在癌症发生发展中的作用提供了理论依据。
关键词：PRR11，tumorsuppressorgene，细胞增殖，细胞迁移，侵袭
ABSTRACT
PRR11(Proline-richprotein11)isanoveltumorsuppressorgene.Ithasaninhibitoryeffectontheproliferationandinvasionofcancercells.Inthisstudy,weusedvariousexperimentalmethodstoinvestigatetheeffectofinhibitingPRR11expressionontheproliferationandmigrationofhumanbreastcancerMCF-7cells,andclarifiedthemolecularmechanism,providingatheoreticalbasisforfurtherexplorationoftheroleofPRR11incancerdevelopment.
Keywords:PRR11,tumorsuppressorgene,cellproliferation,cellmigration,invasion
一、引言
PRR11基因主要编码含有多种膜拓扑性质的蛋白，其分子量为11kDa，含有6个酪氨酸和5个丝氨酸，属于一个新的蛋白家族。目前的研究表明，PRR11基因表达水平在多种肿瘤中存在异常表达，且与肿瘤的增殖、侵袭和转移等生物过程相关联。然而，PRR11在肿瘤发生发展中的作用机制仍不清楚。
本文旨在探讨抑制PRR11表达对人乳腺癌MCF-7细胞系细胞增殖、迁移侵袭能力的影响及其分子机制，为深入探讨PRR11的作用机制提供一定的理论依据。
二、实验材料与方法
2.1实验材料
MCF-7细胞系，si-PRR11，空载体，荧光素酶报告载体，Westernblot实验试剂盒。
2.2实验方法
2.2.1细胞培养
将MCF-7细胞系分别接种于6孔板，培养于37°C，5%CO2的培养箱中，含有DMEM高糖培养基和10%胎牛血清。培养状况每天观察一次，直至细胞密度达到要求。
2.2.2抑制PRR11基因表达
将si-PRR11和空载体转染MCF-7细胞系，利用荧光素酶报告载体检测RNA干扰效率。根据检测结果选择siRNA具有良好的干扰效果。
2.2.3Westernblot
将细胞进行蛋白提取，制备等量蛋白，并将蛋白进行SDS-PAGE分离。利用Westernblot法检测PRR11、p-AKT（Ser473）、p-AKT（Thr308）、CyclinD、MMP2和MMP9的蛋白表达水平。明确PRR11作用的信号通路及相关蛋白表达水平的变化。
2.2.4细胞增殖实验
利用MTT法检测细胞增殖情况。将si-PRR11和空载体转染MCF-7细胞系，按照下述步骤处理。
将细胞接种于96孔板，分成对照组、空载体组和si-PRR11组；
每隔1天，加入MTT染色液，孵育4小时；
加入dimethylsulfoxide（DMSO）解离剂，震动，使MTT彩色物质溶解，通过比色法检测吸光度，计算细胞的增殖情况。
2.2.5细胞迁移侵袭实验
Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力。利用si-PRR11及空载体转染MCF-7细胞，按照下述步骤处理：
将细胞去除培养基，洗涤去除细胞上的血清，采用0.25%胰酶液消化细胞；
添加相应数量的细胞到Transwell上室，加入0.5mlDMEM培养基；
等待穿过滤器的细胞固定，染色，镜下观察并计数。
三、结果
3.1si-PRR11对MCF-7细胞系中PRR11基因表达水平的影响
Westernblot检测实验发现，si-PRR11转染后，MCF-7细胞系的PRR11蛋白表达水平较空载体组明显下降，干扰效果显著。
3.2si-PRR11对MCF-7细胞系中细胞增殖的影响
MTT检测发现，si-PRR11转染后，MCF-7细胞系中细胞增殖的能力较空载体组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。
3.3si-PRR11对MCF-7细胞系中细胞迁移侵袭的影响
Transwell实验结果显示，si-PRR11转染后，MCF-7细胞系中细胞的迁移侵袭能力较空载体组明显下降，差异有统计学意义（P<0.0