KIAA1456抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭及机制研究的中期报告.docx

KIAA1456抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭及机制研究的中期报告
KIAA1456（也称为LPIN3）是一个磷酸肌酸磷酸酯酶家族成员，是一个重要的脂肪酸代谢和胰岛素信号途径的调节因子。近期研究表明，KIAA1456在肺癌的发生与发展中发挥着重要的作用。然而，KIAA1456在肺癌中的确切作用机制还不清楚。本文旨在研究KIAA1456的表达水平对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探究可能的分子机制。
材料和方法：
细胞系和培养条件：
我们选用了A549和H1299肺癌细胞系以及BEAS-2B非癌肺细胞系。所有细胞系均从美国ATCC公司获得，并在RPMI-1640培养液（基本培养液）中添加10％热灭的胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/mL链霉素进行培养。细胞保持在37℃和5％CO2.
siRNA合成与转染：
我们利用siRNA来沉默KIAA1456。siRNA序列为：5’AACGGAAGTGGATACAGTGCC3’。
转染程序中，细胞生长到60%～70%的时候，使用Lipo2000转染试剂进行转染，并按照试剂说明书的指示进行操作。48h后，收集细胞进行下一步分析。
MTT试验：
将A549和H1299细胞系转染siRNAKIAA1456和对照siRNA后，收集细胞，以相等数量种植在96孔板中（每个孔中5000个细胞）。在24、48、72小时的时间点添加20μL5mg/mL的MTT（溶于PBS中）到板中，孔板放置在37℃培养箱中，直至24、48、72等时间点，将细胞光学密度读数得出细胞数量。每一组实验均含有3个重复。
划痕试验：
A549和H1299细胞系以及BEAS-2B细胞系在普通培养基下培养至60%～70%的密度，用吸管头在深度为2mm的无血清RPMI-1640中进行划痕。洗涤一次，然后继续培养至24小时。照相，然后分别加入试验组和对照组的处理，继续培养至24小时，照相。
Transwell试验：
取A549或H1299细胞系转染siRNAKIAA1456和对照siRNA后用PBS洗涤两次，然后用基础培养介质低因子（0.2％血清）将细胞重新悬浮至5×105/mL，将100μL细胞悬液加入上腔室置于24孔板中，在下方加入完整的RPMI-1640培养液，并进一步孵育至24小时。
接下来，移除上腔室中的细胞，并将过滤膜放在乙醇中固定5分钟，然后放在甲醛中固定片固定。染色后，统计并计算每个组细胞的数量。
WesternBlotting:
取A549或H1299细胞系转染siRNAKIAA1456和对照siRNA后，在蛋白加荷缓冲液中裂解细胞，并用BCA方法测定蛋白质浓度，每个样本的蛋白质浓度相等后，将样本用12%SDS-PAGE进行电泳分离，然后将蛋白转移到PVDF膜，并用不同的抗体进行染色。抗体包括KIAA1456、E-cadherin、N-cadherin、CDH2和β-Actin。
结果：
KIAA1456的表达水平与肺癌细胞增殖相关：
通过MTT实验，我们发现，与对照组相比，转染KIAA1456siRNA的A549和H1299细胞系的增殖速率显着减慢（P<0.01）。
KIAA1456的表达水平影响肺癌细胞的迁移和侵袭性:
通过划痕实验和Transwell实验证实，KIAA1456的表达水平对A549和H1299的细胞迁移和侵袭能力产生了影响。我们发现，当KIAA1456被siRNA降低时，A549和H1299不仅在划痕实验中显示出较少的移动能力，而且在Transwell实验中显示出较少的过滤能力。
KIAA1456的表达水平对肺癌上皮细胞的转化发挥重要作用：
通过WesternBlotting发现，KIAA1456-siRNA组的A549和H1299在蛋白质水平上显示了更低的N-cadherin表达，并且E-cadherin表达也有所增加。也就是说，KIAA1456下调促进了细胞向上皮细胞的转化状态。
结论：
本文主要研究了KIAA1456在肺癌细胞中的作用。我们发现，KIAA1456的下调不仅阻止了肺癌细胞的增殖，同时降低了细胞的迁移性和侵袭性，并导致了肺癌细胞向上皮细胞的转化。这表明KIAA1456可能是抑制肺癌发生和发展的一个重要调节因子。我们研究的这些发现为进一步了解肺癌发生机制提供了新方向和启示。