副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性机制研究任务书.docx

副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性机制研究任务书
一、任务概述
副猪嗜血杆菌（Actinobacilluspleuropneumoniae,APP）是一种引起猪类呼吸系统疾病的致病菌，其导致的猪类胸膜肺炎会给猪类养殖业带来重大经济损失。毒素是APP感染机制中的重要因素，其中细胞致死膨胀毒素（CellDeathandHemolysis,Apx）是APP毒素中致病性最强的一种。因此，本任务旨在研究Apx毒素的细胞毒性机制，为APP猪类呼吸系统疾病的防治提供科学依据。
二、主要任务和研究内容
1.Apx毒素的提取与纯化
（1）优化Apx毒素提取和分离纯化方法，确保提取到高质量的Apx毒素。
（2）通过SDS-PAGE和Westernblot验证Apx毒素的纯化程度。
2.Apx毒素在细胞内的毒性机制
（1）利用细胞和毒素作用的方式研究Apx毒素在某一种具有敏感性的病原体细胞内的作用机制。
（2）利用内毒素提取液或溶菌酶等处理方式提取敏感细胞内致死粘液样病理物质（Pus，液体），并在摄氏37度下恒温进行细胞毒性测定。
（3）流式细胞仪对Apx毒素作用后的细胞组分进行分析，明确Apx毒素对于细胞的特异性打击机制。
3.Apx毒素分子机制的研究
（1）建立Apx毒素作用模式，通过克隆毒素基因获得毒素的DNA序列信息。
（2）根据获得的DNA序列信息，预测Apx毒素的分子结构。
（3）利用分子生物学、生物信息学等手段，分析Apx毒素分子结构与其在细胞内的作用机制之间的联系。
（4）建立Apx毒素的结构-活性关系模型，为Apx毒素的专业化改造提供依据。
四、预期研究结果
1.确定Apx毒素的分子结构和作用机制，揭示Apx毒素诱导猪类胸膜肺炎的分子机制。
2.建立Apx毒素的结构-活性关系模型，为Apx毒素的专业化改造提供依据。
3.提高我国APP猪类呼吸系统疾病的防治水平，为猪类养殖健康发展提供科学依据。
五、研究进度安排
第一年：
1.在实验动物模型中测试Apx毒素的致病性，初步确定研究方向。
2.优化Apx毒素提取和分离纯化方法，通过SDS-PAGE和Westernblot验证Apx毒素的纯化程度。
第二年：
1.利用细胞和毒素作用的方式研究Apx毒素在病原体细胞内的作用机制。
2.建立Apx毒素的作用模式，通过克隆毒素基因获得毒素的DNA序列信息。
第三年：
1.根据获得的DNA序列信息，预测Apx毒素的分子结构。
2.利用分子生物学、生物信息学等手段，分析Apx毒素分子结构与其在细胞内的作用机制之间的联系。
第四年：
1.建立Apx毒素的结构-活性关系模型，为Apx毒素的专业化改造提供依据。
2.综合分析研究结果，撰写研究报告，发表论文，申请专利。