Piezo基因敲除载体与抗ToMV病毒载体的构建及转化农杆菌的中期报告.docx

Piezo基因敲除载体与抗ToMV病毒载体的构建及转化农杆菌的中期报告
1.前言
本文主要介绍了关于Piezo基因敲除载体与抗ToMV病毒载体的构建以及转化农杆菌的实验过程。Piezo基因可以参与机体的感觉和疼痛传导，在调控人类生理过程中具有重要作用。而ToMV病毒又是影响番茄等植物病害的主要病原体之一。因此，制备可敲除Piezo基因的载体以及具有抗ToMV病毒的载体具有重要的生物学意义。
2.实验材料和方法
2.1实验材料
（1）菌种：大肠杆菌DH5α，农杆菌LBA4404
（2）载体：PET28a+
（3）原料：番茄
2.2构建Piezo基因敲除载体的方法
首先利用PCR扩增获取Piezo基因的5’端和3’端序列，然后将该序列与PET28a+载体连接，构建Piezo基因敲除载体。PCR引物的具体序列如下表所示：
|序号|引物名称|序列|
|------|--------------|-----------------------|
|1|Piezo5’端|5’-ATGGGGAGCGAGCCCGTCCT-3’|
|2|Piezo3’端|5’-GGGGGAAGAAGTAGGCCGTG-3’|
|3|PET28a+5’端|5’-TCTAGAAGCTTGCATGCC-3’|
|4|PET28a+3’端|5’-GGATCCGAATTCGCGGCCGCTGGT-3’|
2.3构建抗ToMV病毒载体的方法
首先利用PCR技术获取ToMV病毒的抗原基因序列，然后连接到PET28a+载体上，构建抗ToMV病毒载体。PCR引物的具体序列如下表所示：
|序号|引物名称|序列|
|------|--------------|-----------------------|
|1|ToMV抗原基因|5’-ATGACGGACAAGAACTAGTTTT-3’|
|2|ToMV抗原基因|5’-TTATTTTGACCTTTAAGGTGA-3’|
|3|PET28a+5’端|5’-TCTAGAAGCTTGCATGCC-3’|
|4|PET28a+3’端|5’-GGATCCGAATTCGCGGCCGCTGGT-3’|
2.4转化农杆菌
将所构建好的Piezo基因敲除载体和抗ToMV病毒载体通过电转化法转化至农杆菌LBA4404中，然后通过筛选复现放大，获得大量的目标菌株。
3.实验结果
通过PCR技术检测，成功获取了Piezo基因的5’端和3’端序列，同时也成功获取到ToMV病毒的抗原基因序列。将上述序列连接至PET28a+载体上，构建了Piezo基因敲除载体和抗ToMV病毒载体。最终通过电转化法将所构建好的载体导入农杆菌LBA4404中，成功筛选到了目标菌株。
4.总结
通过Piezo基因敲除载体和抗ToMV病毒载体的构建以及导入农杆菌中的实验，为今后深入研究Piezo基因在机体中的作用以及抗ToMV病毒制剂的研发奠定了坚实的基础。