RBM14调控小鼠胚胎干细胞及分化的研究的任务书.docx

RBM14调控小鼠胚胎干细胞及分化的研究的任务书
任务书
一、研究背景
干细胞是一类可以自我更新并且可以分化成多种细胞类型的细胞群体。胚胎干细胞（Embryonicstemcell，ESC）是一种特殊的干细胞，具有无限自我复制能力和多向分化潜能，被广泛应用于组织工程、药物筛选、毒理学研究等领域。然而，ESC的应用也面临很多问题如分化不稳定、易导致肿瘤形成等。因此，控制ESC的分化是重要的研究方向，可为其应用提供更好的保障。
RBM14是二级结构多功能RNA结合蛋白，调控多种RNA生物学过程，如剪切、转运、翻译和降解。在前期研究中，我们发现RBM14在ESC和生殖细胞中表达水平较高。同时，RBM14较低的表达水平会导致胚胎发育异常。这提示RBM14在ESC中具有重要的功能。因此，我们的研究将着重于探讨RBM14在ESC中的作用及其机制。
二、研究目的
本研究旨在探究RBM14在小鼠胚胎干细胞（mESC）中的作用及其分化机制。具体目的如下：
1.验证RBM14在mESC中的表达水平：通过实时荧光定量PCR和Westernblotting等手段验证RBM14在mESC中的表达水平，并确定其表达的时间和空间特点。
2.研究RBM14对mESC的生长和增殖的影响：通过siRNA敲低和/或过表达RBM14进一步验证其对mESC生长和增殖的影响。
3.分析RBM14对mESC分化的调控作用：发掘RBM14在mESC分化过程中的作用及其机制，如与基因调控因子的相互作用及其参与的通路等方面。并探索RBM14在mESC分化过程中的上游和下游分子，阐明RBM14调控干细胞命运转变的分子机制。
三、研究方法
1.细胞培养：使用小鼠胚胎干细胞（mESC）进行研究。将mESC在含有2i/lif的无血清培养基中培养并定期观察其生长状态。
2.转染：利用lipofectamine2000转染siRNA、质粒和lentivirus等，从而得到敲低或过表达RBM14的细胞株。
3.实时荧光定量PCR(q-PCR)：利用SYBRGreenq-PCR检测RBM14的表达，同时检测其下游基因的表达情况。
4.Westernblotting：使用Westernblotting检测RBM14蛋白的表达水平，并观察其调控其他蛋白的表达情况。
5.分子互作：利用捕获靶分子以及转录因子联合免疫共沉淀等技术，检测RBM14与靶分子的相互作用关系。
6.流式细胞术：通过流式细胞术观察mESC的形态、增殖情况、凋亡率等。
四、研究意义
本研究将深入探讨RBM14在ESC中的作用和机制，对于增加人们对干细胞命运转变的理解，迅速推进ESC使用技术的发展，具有重要的科学和临床意义。
1.为提高ESCs分化效率提供理论依据：探明RBM14在mESC分化过程中的机制，有助于研究ESCs分化过程中的重要调控网络，进而提高ESCs的分化效率和分化方向。
2.有助于解决ESC异质性等问题：在ESC分化中，细胞异质性是一个严重的问题。研究RBM14在ESC分化过程中的作用，有助于解决ESC分化过程中的细胞异质性等问题。
3.对干细胞研究提供参考：干细胞研究方向广泛且复杂，这里提出的一些方法和研究手段，可以为干细胞及其应用领域的研究提供一些有益的参考。
五、研究计划和进度安排
时间|内容||
--|--|--:|
第1-2周|文献调研||
第3-4周|mESC的培养、分离和培养特点的观察||
第5-6周|RBM14基因表达的检测及siRNA敲低和/或过表达|RBM14的表达检测、敲低实验及过表达实验|
第7-8周|mESC的分化试验|RBM14敲低实验对mESC分化的影响|
第9-10周|分析RBM14与各种基因因子的互作关系|RBM14与Np-1等因子的相互作用检测|
第11-12周|观察RBM14的基因底物及机制|观察RBM14的基因底物以及与特定通路之间可能存在的关系|
第13-14周|结果分析、讨论和总结|总结结果，撰写论文|
六、研究的预期结果
在本研究中，我们将阐明RBM14在mESC中的作用，并揭示其参与mESC分化的机制。我们预期取得如下研究成果：
1.确定RBM14在ESC中的表达水平及其表达的时间和空间特点。
2.验证RBM14对小鼠胚胎干细胞生长和增殖的影响。
3.揭示RBM14在mESC分化过程中的作用和机制，以此为基础解决ESC分化的相关问题。
4.对干细胞及干细胞研究方向提供有益的参考。
七、论文写作和撰写规范
研究结果以小结、技术路线、实验结果、结果分析和探讨、结论、参考文献等形式进行论文撰写。
注：参考文献应符合实验方法学报告有关规定。