1第一章--菌种与种子扩大培养.ppt

第一章菌种与种子扩大培养诱变育种：诱变是工业发酵稳产高产的重要保证；分离思路
新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。

实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。新种分离与筛选的步骤采样2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。
3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。增殖培养纯种分离性能测定工业生产常用菌种1细菌(Bacteria)2放线菌(Actinomycetes)2放线菌(Actinomycetes)3单细胞真菌----酵母(Yeast)4多细胞真菌----霉菌(Molds)4多细胞真菌----霉菌(Molds)抗生素生产有关的微生物氨基酸生产菌的要求：食品工业微生物诱变育种诱变剂诱变育种步骤紫外线的诱变育种操作步骤
1．将细菌培养液以3000r／min离心5min，倾去上清液，将菌体打散加入无菌生理盐水再离心洗涤。
2．将菌悬液放入一巳灭菌的，装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动，以打散菌体。将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤，单细胞滤液装入试管内，一般处于浑浊态的细胞液含细胞数可达107-108个／ml左右，作为待处理菌悬液。
3．取2～4m1制备的菌液加到直径9cm培养皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力搅拌器上、15W紫外线下30cm处。在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照射10～50s。操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。4．取未照射的制备菌液和照射菌液各0.1ml进行稀释分离，计数活菌细胞数。
5．取照射菌液2ml于液体培养基中(300ml三角瓶内装30ml培养液)，120r／min振荡培养4～6h。
6．取中间培养液稀释分离、培养。
7．挑取菌落进行检测。
基因的直接进化育种能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成
产物纯菌种几种常用菌种保藏方法的比较种子：将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。

种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。
种子扩培的目的二，种子制备的过程：
实验室种子制备阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将其称为实验室阶段的种子培养。
生产车间种子制备阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归发酵车间管理，因此称这些培养过程为生产车间阶段。实验室种子的制备

对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子，这样操作简便，不易污染杂菌。
对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用液体培养法。试管→三角瓶→摇床→种子罐生产车间种子制备（1）表面培养固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。固体培养具有以下优点：
①原料：以谷物和农业废物为主要原料，只需外加适量水分、无机盐等。培养基组成简单。
②防止污染：利用霉菌能在水分较低的基质表面进行增殖的特性，在这种条件下，细菌生长不好，因此不易引起细菌污染。
③通气：无论浅盘或深层固体通风制曲，可以在曲房周围使用循环的冷却增湿的无菌空气来控制温湿度，并且能根据菌种在不同生理时期的需要，灵活加以调节。在固体培养中，氧气是由基质粒子间空隙的空气直接供给微生物，比液体培养时的用通气搅拌供给氧气节能。
（3）液体深层培养（4）载体培养法影响种子质量的因素及控制2，影响种子质量的主要因素
（1）培养基
主要是碳源、氮源、无机盐、生长素和水等。
（2）培养条件
①温度：温度直接影响生长和酶的合成；
②pH值：对微生物有明显的影响。
③通气搅拌：（溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用）
④泡沫(危害：影响微生物对氧的吸收；妨碍CO2的排除；减少设备利用率)
（3）染菌的控制
染菌原因：设备、管道、阀门漏损、发酵罐结构“死角”、灭菌不彻底、空气净化不好、无菌操作不严、菌种不纯；
（4）种龄及接种量种龄：是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。
通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。时间太长，菌种趋于老化，生产能力下降，菌体自溶；种龄太短，造成发酵前期生长缓慢。
接种量：是指移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例。