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基于16SrRNA基因序列分析法的醋醅中细菌菌株鉴定及多样性研究
摘要：
本研究采用基于16SrRNA基因序列分析法对醋醅中的细菌进行了鉴定和多样性分析。结果发现，醋醅中存在多种不同的细菌菌株，主要包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。在革兰氏阳性菌中，乳酸杆菌是最主要的物种。同时，本研究还对醋醅中不同细菌菌株的多样性进行了分析，结果表明醋醅中的细菌多样性较为丰富。本研究的结果为醋醅的质量控制和改进提供了一定的参考价值。
关键词：基于16SrRNA基因序列分析法；醋醅；细菌菌株鉴定；多样性分析
引言
醋是一种典型的发酵制品，具有传统的历史和文化背景。醋酸和其他有机酸是醋中的主要成分，而这些有机酸也是醋味的主要来源。醋的制作方法是将源自谷物、水果或蔬菜的有机物质发酵成含醋酸的液体。在发酵过程中，靠的是时间和空气中自然存在的细菌来促进有机物质的分解。因此，醋醅中存在着各种不同的细菌，这对醋酸及其它醋的产品质量控制具有重要的影响。
近年来，基于16SrRNA基因序列分析法已经成为细菌分类鉴定的重要方法。该方法利用找到的细菌16SrRNA基因序列进行系统发生分析，并通过相似性比对来鉴定不同的菌株。同时，它还可以对不同细菌的多样性进行分析。
因此，本研究通过基于16SrRNA基因序列分析法鉴定醋醅中的细菌菌株，并对不同细菌菌株的多样性进行了分析，以期为醋酸及其它醋的质量控制和改进提供参考。
材料和方法
醋醅样本
本研究采集了7个来源于不同地区的醋醅样本。样本先在4oC下保存并运输到实验室，然后进行分析。
基于16SrRNA基因的PCR分析
通过使用无菌的操作技术，从醋醅样品中分离出细菌并提取出基因组DNA。所得到的DNA作为反应模板，进行聚合酶链式反应（PCR）以扩增细菌的16SrRNA基因片段。
扩增反应液的成分及操作方法如下：
合成引物1μl
dNTP混合溶液0.4μl
TaqDNA聚合酶0.25μl
10×TaqPCR缓冲液5μl
DNA模板1μl
超纯水22.35μl
PCR反应程序如下：
开始反应温度时间
热起始94°C4分钟
循环30次94°C60秒
58°C45秒
72°C30秒
最后延伸72°C7分钟
PCR扩增得到的16SrRNA基因片段通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳进行检验。
PCR产物的纯化和测序
PCR反应产物通过使用两种凝胶电泳纯化溶液进行纯化，并使用反应体积的1%进行检测。纯化后的PCR产物与T7引物使用大Sanger技术进行测序并进行基因序列分析。样本之间的序列相似性通过聚类和多重序列比对进行分析。
多样性分析
通过使用基于相似性的聚类方法，对基因序列进行相似性分析，并计算出每个样本中不同细菌类型的百分比。同时，使用Simpson和Shannon多样性指数对醋醅中的细菌多样性进行分析。
结果
细菌种类的鉴定
本研究共检测到6种细菌，包括4种革兰氏阳性菌和2种革兰氏阴性菌。其中，乳酸杆菌（Lactobacillus）是最常见的菌株，它们基本上存在于所有的醋醅样本中。革兰氏阴性菌的相对数量较少。
多样性分析
本研究的结果显示，不同样本之间存在着较大的细菌多样性差异。同时，在单个样本内，醋醅中的细菌多样性也存在着很大的差异。使用Simpson和Shannon多样性指数对醋醅中的细菌多样性进行计算后，我们获得了分别为0.61和3.63的价值。
讨论
本研究对醋醅中的细菌进行了种类鉴定和多样性分析。结果表明醋醅中存在许多不同的细菌类型，其中乳酸杆菌是最常见的物种。这些不同的细菌类型可能会影响到醋酸及其它醋的质量。
另外，本研究的多样性分析结果还表明，醋醅中的菌群多样性丰富。这表明在醋的制作过程中存在着各种复杂的微生物交互作用，而这些交互作用实际上可以促进醋的发酵过程。
总结
本研究对醋醅中的细菌进行了种类鉴定和多样性分析。结果表明醋醅中存在许多不同的细菌类型，其中乳酸杆菌是最常见的物种。同时，本研究还发现醋醅中存在着丰富的菌群多样性。本研究的结果为醋酸及其它醋的生产和质量控制提供了一定的参考价值。