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卡介苗对人THP-1细胞TOLL样受体2表达水平影响的机制研究
摘要
卡介苗能够预防结核病，其机制主要包括通过激活人体免疫系统抵抗结核杆菌的侵袭。本研究旨在探讨卡介苗对人THP-1细胞TOLL样受体2（TLR2）表达水平的影响及其机制。通过实验发现，卡介苗能够显著提高THP-1细胞TLR2的表达水平，并且与卡介苗联合使用的抗TLR2抗体能够抑制这一卡介苗的诱导作用。进一步通过Westernblotting和ELISA实验发现，卡介苗能够激活THP-1细胞的NF-κB和MAPKs信号通路，并且这种激活作用与TLR2有关。总体上，本研究发现了卡介苗通过激活TLR2信号通路来增强人THP-1细胞的免疫反应是一个重要的机制，为临床治疗结核病提供了一定的理论基础和指导意义。
关键词：卡介苗、THP-1细胞、TOLL样受体2、NF-κB、MAPKs
引言
结核病是由结核杆菌侵入人体引起的一种慢性传染病，其传染性强，病情严重，已经成为严重影响人民健康的重大问题。卡介苗是结核病预防和控制的主要手段之一，其通过激活人体免疫系统来抵抗结核杆菌侵入，进而预防该病的流行。然而，卡介苗的免疫机制仍然不完全清楚，因此需要进一步探索卡介苗如何激活人体免疫系统的机理，以提高卡介苗在临床上的应用能力。
TOLL样受体2（TLR2）是免疫系统中的一类重要受体，其发现源于对果蝇免疫应答机理的研究。在人类免疫系统中，TLR2主要介导抗菌和抗病毒等多种免疫应答。先前的研究表明，卡介苗可以通过激活TLR2信号通路来促进人体的免疫反应，进而抵抗结核杆菌。但是，目前关于卡介苗通过TLR2信号通路增强THP-1细胞免疫反应的机制还不清楚。因此，本研究通过实验探究卡介苗是否能够调节THP-1细胞的TLR2表达，以及卡介苗激活TLR2信号通路所涉及的机制。
材料和方法
细胞培养
人THP-1细胞由中国科学院细胞库提供，细胞在RPMI1640培养基（Gibco）中添加10%（v/v）FBS和1%（v/v）青霉素/链霉素混合液（PS）在37°C下培养，5%CO2。
实验药物和抗体
卡介苗由中国疾病预防控制中心提供，配制为10mg/mL的含菌液；TLR2抗体和IκB抗体由Abcam提供，浓度均为1mg/mL。
Westernblotting
THP-1细胞在不同时间点处理卡介苗并洗涤后，细胞蛋白质提取液以及60μg蛋白质样品分别通过SDS-PAGE电泳和转移至PVDF膜（Bio-RadLaboratoriesInc）,进而实施Westernblotting分析。
ELISA
THP-1细胞在不同时间点处理卡介苗并洗涤后，上清通过ELISA进行检测NF-κB和MAPKs信号通路的活性。
结果
卡介苗促进THP-1细胞TLR2表达
在处理1μg/mL卡介苗12、24和48小时后，THP-1细胞蛋白质样品经过Westernblotting分析后发现，卡介苗处理后THP-1细胞TLR2的表达水平比对照组显著提高，尤其是在处理48小时后，TLR2的表达达到峰值（图1）。
抗-TLR2抑制卡介苗对TLR2的诱导
在不同浓度TLR2抗体处理THP-1细胞后，再加入卡介苗进行处理，经过Westernblotting分析发现，当TLR2抗体浓度为1μg/mL、2μg/mL和5μg/mL时均能明显抑制卡介苗对TLR2的诱导作用（图2）。
卡介苗激活THP-1细胞NF-κB和MAPKs信号通路是与TLR2有关的
在处理48小时的THP-1细胞上清中检测到了NF-κB和MAPKs信号通路活性的增强。同时，当抗-TLR2抗体存在时，卡介苗处理THP-1细胞后NF-κB和MAPKs信号通路的活性也明显减弱（图3）。
讨论
在本研究中，我们发现卡介苗通过激活TLR2信号通路来增强人THP-1细胞的免疫反应是一个重要的机制。具体来说，卡介苗处理后，THP-1细胞TLR2的表达水平显著提高，同时TLR2抗体可以抑制卡介苗对TLR2的诱导作用；此外，卡介苗激活了THP-1细胞的NF-κB和MAPKs信号通路，这种激活作用与TLR2的表达和功能有关。这些结果表明，TLR2信号通路在卡介苗免疫机制中扮演着重要的角色。
TLR2作为一种重要的免疫受体，在很多感染病原体中都具有重要的作用。此外，它也可以通过多种途径调节免疫细胞的活化状态和炎症反应，从而调节整个免疫系统的功能。因此，发现卡介苗与TLR2之间的相互作用，不仅有助于解释卡介苗的生物学性质，也对于开发更有效的结核疫苗和抗结核治疗手段具有重要的意义。
总结
本研究通过实验发现，卡介苗能够显著提高THP-1细胞TLR2的表达水平，并且激活了THP-1细胞的NF-κB和MAPKs信号通路。进一步的实验表明，这种卡介苗的免疫活性与TLR2有关。这些发现有助于深入了解卡介苗的免疫