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活化的Toll样受体对人内皮(祖)细胞生物学功能的影响及其机制研究的中期报告
本研究旨在探讨活化的Toll样受体（TLR3、TLR4、TLR7和TLR9）对人内皮（祖）细胞生物学功能的影响及其机制。研究计划按照以下步骤进行：
1.实验设计：
选取人内皮（祖）细胞系，包括内皮细胞系（如HUVECs）和内皮祖细胞系（如EPCs），分别进行细胞培养和处理实验。将细胞分成四组，分别进行对照组、TLR3激活组、TLR4激活组、TLR7/9激活组。对照组细胞不进行任何处理，其他三组细胞分别用相应的激动剂（如多聚核苷酸、LPS、imiquimod等）激活TLR3、TLR4、TLR7/9通路，处理时间和剂量均经过优化。
2.生物学功能研究：
在进行各种生物学功能实验之前，需要先对细胞进行处理，并对处理后的细胞进行各种分析。生物学功能研究包括：
（1）细胞增殖：利用MTT法或CCK-8法测定细胞增殖情况。
（2）细胞迁移：Transwell法测定细胞迁移的变化。
（3）细胞凋亡：flowcytometry测定细胞凋亡率。
（4）细胞系特异性标记的表达：qRT-PCR和westernblot测定各种内皮标记物的表达情况。
（5）氧化应激：利用DHE染色和ROS检测试剂盒测定氧化应激的变化。
3.机制研究：
选取几个最显著的变化比较明显的生物学功能指标，以及内皮分化相关的分子标记物，采用生物信息学手段分析数据。试图揭示活化的TLRs可能是通过启动哪些特定的信号途径来影响人内皮（祖）细胞的生物学功能。
目前，实验1已经完成，总结如下：
1.向细胞培养基中添加TLR激动剂，可以明显地增加细胞对应TLR的mRNA和蛋白表达水平，且呈剂量依赖性。
2.TLR3/4/7/9激活对细胞的增殖、迁移和凋亡率均有不同程度的影响。其中，TLR4激活可以促进细胞增殖和迁移，抑制细胞凋亡，而其他TLRs激活则会抑制细胞增殖和迁移，促进细胞凋亡。
3.TLR3/4/7/9激活也可以影响细胞对H2O2的反应。TLR4激活可以增加细胞的抗氧化水平，保护细胞免受H2O2诱导的氧化应激；而其他TLRs激活则会增加细胞对H2O2的敏感性和氧化应激。