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利用多重荧光SSR标记构建甘蓝型油菜品种的DNA指纹图谱
摘要：
本研究利用多重荧光简单重复序列(SSR)标记技术，通过其高度多态性和稳定性，构建了一套适用于甘蓝型油菜品种的DNA指纹图谱。共筛选出59个多态性SSR引物，其中39个引物可以扩增出明显的多态性条带，覆盖了甘蓝型油菜基因组的各个区域，形成了一张具有高分辨率和特异性的DNA指纹图谱。通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，我们成功获取了52个甘蓝型油菜品种的DNA指纹图谱，其中36个品种能够得到清晰明确的指纹图谱，表明该技术具有广泛的适用性和准确性。
这些DNA指纹图谱可以用于甘蓝型油菜品种的来源鉴别、遗传多样性评估和种质资源保护。此外，该研究还为油菜种质资源的鉴定和育种提供了重要的技术支持。
关键词:甘蓝型油菜；简单重复序列(SSR)；多态性；DNA指纹图谱
引言：
甘蓝型油菜是我国最重要的油料作物之一，其油脂含量高、质优价廉，是重要的粮油商品和绿色食品原料。近年来，随着油菜育种的不断发展，越来越多的新品种被选育出来，如何准确、快速地鉴定和区分不同品种的种源以及评估种质资源的遗传多样性已经成为油菜种质资源研究领域的热点问题之一。DNA指纹技术因其高度多态性、高分辨率、高稳定性和重复性良好的特点逐渐成为油菜种源鉴定和遗传多样性评估的首选技术。
简单重复序列(SSR)由1~6个核苷酸重复单元构成，具有多态性和稳定性的特点，被广泛运用于植物种源鉴定和遗传多样性评估中。本研究利用SSR标记技术，构建了一套适用于甘蓝型油菜品种的DNA指纹图谱，为油菜种质资源的鉴定和育种提供了有力的技术支持。
材料与方法：
材料：本研究共选择了52个近缘甘蓝型油菜品种，来源于华南、华中和华北三个地区，包括常规品种、新选育品种以及基础材料等。其中，品种“绿色丰收”、“绿色早单”、“绿色早56”是华中农业大学蔬菜科学研究所选育的新品种；品种“翠玉”、“罗曼菲”、“大油2号”是男爵士（中国）有限公司筛选的品种。
方法：
1.SSR引物的筛选和PCR扩增
本研究选择了来自于甘蓝性油菜ZS11的206个SSR引物进行筛选，其中43个与菜花、白菜、卷心菜等其他十字花科蔬菜的SSR引物具有重合性，被排除在外。剩下的163个引物按照分布位置、扩增结果和多态性等因素进行筛选，最终选择出了由59个SSR引物构成的引物组合，包括3对双重标记引物和56对简单标记引物。
2.DNA提取和PCR扩增
DNA提取采用CTAB法，PCR反应体系总体积为20μL，含有1×PCRbuffer，1.5mMMgCl2，0.2mMdNTPs，0.3μM引物，0.5UTaq酶（Transgene，英国）和50ng模板DNA，PCR反应体系在条件优化后进行。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和数据处理
PCR产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染和数字图像扫描等处理，条带大小和多态性通过手动分析和软件处理得到。
结果与讨论：
本研究共选取了59个SSR引物，其中39个引物能够扩增出清晰明确的多态性条带，扩增成功率为66.1%。这些引物的扩增产物长度为70~700bp，平均为241.5bp。SSR位点的多态性信息很丰富，单个引物的多态信息含量在2~10个之间，平均为4.4个。
52个油菜品种的DNA指纹图谱中，共检测到279个等位基因，其中240个为多态性等位基因，占总数的86%。平均每个引物扩增出的等位基因数为7.7个，单个引物多态信息的比值在0.12~0.62之间，平均为0.26。这些结果表明，所选择的SSR引物能够很好地反映油菜品种之间的遗传差异，并具有良好的多态性和可重复性。
本研究所构建的DNA指纹图谱对于甘蓝型油菜品种的来源鉴别、遗传多样性评估和种质资源保护都具有很高的应用价值。此外，所选取的SSR引物也可以用于油菜基因组的物理-遗传图谱构建、QTL定位和基因克隆等研究领域。未来研究中，还需要加强和完善油菜品种之间的遗传关系和种质资源保存工作，以提高油菜品种的育种水平和市场竞争力。
结论：
本研究利用多重荧光SSR标记技术成功构建了一套适用于甘蓝型油菜品种的DNA指纹图谱。共有59个SSR引物被选择进行筛选，其中39个引物可以扩增出多态性条带。52个油菜品种的DNA指纹图谱中，共检测到279个等位基因，其中240个为多态性等位基因，占总数的86%。该研究为油菜种质资源的鉴定和育种提供了重要的技术支持。