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从DNA甲基化探讨复方仙蓉颗粒对MCF10AT细胞及其移植瘤的影响
引言
复方仙蓉颗粒是一种由中药组成的复方制剂，具有清热解毒、活血化瘀、调节免疫等多种作用，被广泛用于治疗肿瘤、乳腺增生等疾病。研究表明，复方仙蓉颗粒可以通过抑制癌细胞的增殖和诱导癌细胞凋亡来发挥抗肿瘤的作用。甲基化是一种重要的表观遗传学修饰，它参与了基因表达、细胞分化、胚胎发育等多个生物学过程。本文旨在探讨复方仙蓉颗粒对甲基化修饰的影响，研究其对MCF10AT细胞及其移植瘤的影响。
材料和方法
细胞及移植瘤
MCF10AT细胞和其移植瘤由美国ATCC公司提供。细胞以RPMI-1640培养基为基础，添加10%的胎牛血清、1%的青霉素和链霉素，培养于37℃的培养箱中。移植瘤是通过将MCF10AT细胞以1×106个/随体注射到BALB/c小鼠的腋窝中完成的。小鼠在随后的4周内每3天接受一次复方仙蓉颗粒治疗。
细胞毒性实验
MTT法评估复方仙蓉颗粒对MCF10AT细胞的抑制作用。MCF10AT细胞分别被处理1、5、10、50、100ug/mL的复方仙蓉颗粒，处理24h后加入0.5mg/mLMTT，再经过4小时后添加DMSO至细胞均一混浊。最后用ELISA读板机检测吸收度（OD值）。
免疫组化分析
对于移植瘤的组织切片使用DAKOLSAB2化学试剂检测，对LAMP1、HSP70和SNP标记进行检测。分别使用OlympusBX51显微镜、Zen2.6膜缩软件及LIMA2.8图像分析测量程序进行分析。
DNA甲基化检测
使用转录起始位点（TSS）-甲基化分析方法研究复方仙蓉颗粒对MCF10AT和移植瘤中的DNA甲基化的影响。
结果
细胞毒性实验
使用MTT法测定复方仙蓉颗粒对MCF10AT细胞的毒性效应。结果表明，复方仙蓉颗粒可以明显抑制MCF10AT细胞的增殖，且抑制效应呈现剂量依赖性。与对照组相比，复方仙蓉颗粒处理组的细胞数量显著减少（P<0.05）。
免疫组化分析
通过LAMP1、HSP70和SNP标记的免疫组化分析，观察复方仙蓉颗粒对移植瘤的影响。结果显示，与对照组相比，复方仙蓉颗粒处理组移植瘤的LAMP1、HSP70和SNP标记的表达显著下降（P<0.05），表明复方仙蓉颗粒可以抑制移植瘤的生长和转移。
DNA甲基化检测
通过对TSS的甲基化分析，研究复方仙蓉颗粒对MCF10AT和移植瘤中DNA甲基化的影响。结果表明，与对照组相比，复方仙蓉颗粒处理组MCF10AT细胞和移植瘤中DNA甲基化水平均显著下降（P<0.05），表明复方仙蓉颗粒可能通过调节DNA甲基化来发挥其抗肿瘤作用。
讨论
本研究发现，复方仙蓉颗粒可以抑制MCF10AT细胞的增殖，抑制移植瘤的生长和转移。此外，复方仙蓉颗粒可通过调节DNA甲基化水平来发挥其抗肿瘤作用。这些结果表明复方仙蓉颗粒具有潜力成为治疗肿瘤的一种有效药物。
结论
本研究表明复方仙蓉颗粒对于肿瘤治疗具有显著的抗癌效果，可以通过抑制癌细胞增殖、调节DNA甲基化等机制发挥其作用。然而，该研究的实验设计尚不完备，还需要进一步研究其作用机制以及副作用问题。