中度嗜盐菌产酯酶菌株的筛选鉴定、产酶条件及酶学性质研究.docx

中度嗜盐菌产酯酶菌株的筛选鉴定、产酶条件及酶学性质研究
中度嗜盐菌产酯酶菌株的筛选鉴定、产酶条件及酶学性质研究
摘要：
中度嗜盐菌具有生活在高盐环境下的优良特性，具有一定的应用潜力。本研究从海水中分离筛选到一株中度嗜盐菌，通过16SrRNA序列分析，鉴定其为Halomonassp.HJHS-1。在优化产酯酶条件的基础上，研究了酶学性质。结果显示，该菌株在最适温度为40℃、最适pH为8.0、NaCl浓度为10%、反应时间为10min时酯酶活性最高。酶学性质研究表明，该酯酶在pH为8.0时最活性，它能够在高温高盐环境下稳定，并且受到金属离子的影响。
关键词：中度嗜盐菌、酯酶、酶学性质、产酶条件
Introduction：
中度嗜盐菌是广泛存在于各地的一类高盐度微生物，这种菌类在高盐环境中生长和繁殖的能力较强，被广泛用于生物资源开发、工业生产、环境治理等方面。酯酶是在生物催化反应中具有重要意义的一类酶，广泛应用于制药、食品、化工等领域。因此，利用中度嗜盐菌产酯酶的研究具有重要的实践价值。
MaterialsandMethods：
菌株的分离与鉴定
本实验从海水中分离筛选中度嗜盐菌，经纯化培养后，获得一株能够快速生长且典型形态特征显着的单株菌。该菌通过16SrRNA序列分析，确定为Halomonassp.HJHS-1。
产酶条件研究
确定最适温度：将酯酶反应液置于不同温度在比色皿中，并在每个温度下测定酯酶的活性，得出标准曲线后，确定最适温度。
确定最适pH值：在pH值为5.0-10.0条件下进行反应，并测定酶的活性，得出标准曲线后，确定最适pH。
确定最适浓度的NaCl：依次考察NaCl浓度为0%,5%,10%,15%，20%时的酶活性变化，建立标准曲线，确定最适NaCl浓度。
测定反应时间：在最适条件下，采用不同反应时间下的酶活力，得到标准曲线，确定最适反应时间。
酶学特性研究
测定最适温度：在不同温度下测定酶的活力，得出标准曲线，确定最适温度。
测定最适pH：在不同pH值下测定酶的活力，得出标准曲线，确定最适pH。
热稳定性试验：将酶溶液存于不同温度下一定时间，测定酶的活力变化，评定酶的热稳定性。
储藏稳定性：将酶干燥储藏在回潮交换器内不同时间，测定酶的活力变化，评定酶的储藏稳定性。
金属离子效应：在不同浓度的金属离子的条件下，测定酶的活力变化情况，评估金属离子对酶的效应。
Resultsanddiscussions：
通过实验，确定该菌株能够在40℃下最快生长，最适pH为8.0，NaCl浓度为10%时酯酶的活性最高，反应时间为10min。酶学性质研究表明，最适pH值为8.0，最适温度为40℃，该酯酶在高温高盐环境下能够保持稳定，添加钙离子和锰离子能够提高酶的稳定性，添加氯离子和铁离子能够抑制酶的活性。
结论：
通过本实验，筛选到一株中度嗜盐产酯酶菌株Halomonassp.HJHS-1，并研究了其产酶条件和酶学特性。该菌株在高温高盐的环境下能够稳定生长和产生酯酶，研究结果对中度嗜盐菌和酶的产业化开发和应用具有重要意义。
参考文献：
1.黄连敏，李华.中度嗜盐菌产酯酶菌株的筛选与鉴定[J].四川环境，2014,3:19-21.
2.EmreArslan,SilaCopurCicek,FerahCokmus,etal.,“AnovelhalotolerantlipasefromthermophilicAnoxybacillusthermarum:characterizationandevaluationofitsdetergentcompatibility”,JournalofMolecularCatalysisB:Enzymatic,2014,vol.100,pp.141-150.
3.MahmoudE.S.Soliman,EssamA.Elbialy,“ImprovementofEnzymaticTransesterificationofWaste-CookingOilforBiodieselProduction,”JournalofAdvancedResearch,2014,vol.5,no.4,pp.523-532.