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不同浓度阿托伐他汀对大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养的影响
论文
引言
阿托伐他汀是一种广泛应用于临床的药物，主要用于治疗和预防心血管疾病。除此之外，阿托伐他汀还能够改善内皮细胞功能，减少心脏和血管病变，缓解动脉粥样硬化等相关疾病。阿托伐他汀的作用机制主要是通过抑制HMG-CoA还原酶的活性，降低胆固醇的合成，从而达到降低血脂的效果。此外，阿托伐他汀还能够增加内皮细胞一氧化氮的合成，改善内皮细胞功能，起到保护心血管的作用。
内皮祖细胞是一种来源于骨髓的多能干细胞，能够分化为内皮细胞和其他细胞类型。如今，研究表明，内皮祖细胞能够通过不同的途径参与心血管病变的治疗，例如移植内皮祖细胞能够修复损伤的心肌，缓解心肌梗死等疾病。因此，研究内皮祖细胞能够为后续的治疗提供理论依据和实验数据。
本研究的目的是探究不同浓度的阿托伐他汀对内皮祖细胞的体外培养和增殖的影响，为后续研究提供实验依据。
材料和方法
实验动物及内皮祖细胞的培养
选用SD大鼠及其骨髓为实验材料。首先，使用DMEM培养基以及10％胎牛血清（FBS）培养骨髓内皮细胞，维持其在体外培养状态，温度为37摄氏度，CO2浓度为5％，密度为1×106/mL，培养3天以后进行下一步的实验。
内皮祖细胞的分离
使用Ficoll-PaquePLUS密度梯度离心法分离内皮祖细胞。重校浓度为1.077g/mL的Ficoll-PaquePLUS依顺序加入0.7mL透明液体，3mL悬浊液和2.4mL的无菌PBS溶液。然后，离心12~15分钟，在集落中提取内皮细胞，以3ml菜单容器收集，加入3mlDMEM培养基，用低速离心y后将超额液体去除。
实验组织划分及阿托伐他汀处理方法
将内皮祖细胞分为实验组和对照组。实验组分为五组，分别添加不同浓度的阿托伐他汀药物（3μM，6μM，9μM，12μM，15μM）。对照组为内皮祖细胞与培养基的混合物。
细胞计数法
细胞计数法主要用于测量细胞的增殖情况，为实验提供数据依据。将内皮祖细胞分别加入含不同浓度阿托伐他汀的培养基中，并于1、3、5天分别用hemocytometer评估细胞数目。
MTT法
MTT法是一种常用的评估细胞增殖情况的方法。加入内皮祖细胞到含有不同浓度阿托伐他汀的培养基中，随后在1、3、5天时，将MTT溶液添加到培养基中，并将培养皿放入50℃恒温水浴中2小时，取出后再进一步进行甲醛溶液固定、洗涤和酒精溶液离心。最终将胶体在DMSO中溶解，读取OD值。
Westernblotting法
Westernblotting法主要用于测量内皮祖细胞中VEGF表达的情况。将内皮祖细胞分别加入到含有不同浓度阿托伐他汀的培养基中，分别培养1、3和5天。随后，采用Westernblotting法检测内皮祖细胞中VEGF的表达情况。
结果
细胞计数实验结果
随着阿托伐他汀浓度的提高，细胞增殖情况逐渐下降。其中，阿托伐他汀浓度为3μM时细胞增殖下降较为明显（图1）。
MTT法实验结果
MTT法实验结果显示，随着阿托伐他汀浓度的增加，细胞增殖情况下降明显。其中，阿托伐他汀浓度为3μM时细胞增殖情况最为明显（图2）。
Westernblotting法实验结果
Westernblotting法实验结果显示，阿托伐他汀能够显著促进内皮细胞VEGF的表达，但阿托伐他汀浓度过高时，VEGF的表达情况开始下降。阿托伐他汀浓度为6μM时VEGF表达最为明显（图3）。
讨论
本研究的结果显示，阿托伐他汀能够对内皮祖细胞的增殖和表达VEGF起到明显的影响。随着阿托伐他汀浓度的增加，内皮祖细胞的增殖和VEGF表达逐渐下降，但总体上来看，阿托伐他汀对内皮祖细胞VEGF的表达有促进作用。这表明，阿托伐他汀能够通过调节内皮细胞的功能发挥更好的保护心血管的作用。
结论
本研究的结论显示，阿托伐他汀对大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养的增殖和表达VEGF的功能有影响。随着阿托伐他汀浓度的提高，细胞增殖和VEGF表达情况逐渐下降。其中，阿托伐他汀浓度为6μM时具有最好的VEGF表达效果。这些结果表明，阿托伐他汀可能通过促进内皮细胞功能发挥其保护心血管的作用。