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RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响
摘要：
PARP-1是DNA修复和细胞死亡调控的重要分子，其异常表达在癌症中存在着明显的相关性。本文利用RNA干扰技术抑制PARP-1基因表达，研究其对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响。实验结果表明，RNA干扰成功抑制了PARP-1的表达，可以显著抑制卵巢癌细胞的增殖，同时降低细胞耐药性的发生，该研究提供了一个新的PARP-1抑制剂的筛选方法，并为卵巢癌的治疗提供了新的思路。
关键词：RNA干扰；PARP-1；卵巢癌；增殖；耐药性
Abstract:
PARP-1isanimportantmoleculeinvolvedinDNArepairandcelldeathregulation,withaclearcorrelationwithcancerinabnormalexpression.Inthispaper,RNAinterferencetechnologywasusedtoinhibittheexpressionofPARP-1,andtheimpactontheproliferationanddrugresistanceofovariancancercellswasstudied.TheresultsshowedthatRNAinterferencesuccessfullyinhibitedtheexpressionofPARP-1,significantlyinhibitedtheproliferationofovariancancercells,andreducedtheoccurrenceofdrugresistance.ThisstudyprovidesanewscreeningmethodforPARP-1inhibitorsandprovidesnewideasforthetreatmentofovariancancer.
Keywords:RNAinterference;PARP-1;ovariancancer;proliferation;drugresistance
1.引入
卵巢癌是妇女生殖器官恶性肿瘤中常见的一种，也是女性死亡原因的主要之一。与其他常见癌症相比，卵巢癌往往发现时早期并不明显，症状轻微且难以发现，是一种高度恶性的肿瘤。因此，发现新的针对卵巢癌的有效治疗方法是一个迫切的需要。
PARP-1(聚合酶酶联反应酶-1)是一种基于核苷酸的酶，具有DNA修复和基因转录调控的作用。PARP-1异常表达与癌症的持续增殖和转移有关，因此成为了一种治疗癌症的潜在靶点。PARP-1抑制剂已被发现可以增强放疗和化疗的疗效，同时也被研究用于单独治疗某些癌症。
RNA干扰是一种基于基因极化的物种特异性的基因沉默技术，可以防止基因转录。通过RNA干扰技术可以有效地抑制靶基因的表达和函数，因此该方法在治疗癌症和基因治疗方面受到了广泛的关注。
本研究利用RNA干扰技术抑制PARP-1基因的表达，研究其对卵巢癌细胞增殖和药物耐受性的影响，探究PARP-1对卵巢癌生长和治疗的作用，为卵巢癌的治疗提供科学依据。
2.材料与方法
2.1细胞培养
人卵巢癌细胞株SKOV3和A2780的细胞系在DMEM培养基含10%的胎牛血清（FBS）中培养，温度保持在37°C。
2.2RNA干扰和细胞转染
使用HiperfectsiRNA转染试剂将PARP-1siRNA和CONTROLsiRNA转染到SKOV3和A2780中。转染后，培养细胞48小时检测PARP-1mRNA水平，转染重复3次。
2.3实验设计
采用MTT分析细胞的增殖。检测细胞的治疗药物敏感度使用MTT;将细胞在半满的96孔板中培养24小时，每个孔位添加不同的治疗药物，细胞进一步培养36小时并使用MTT。
2.4检测PARP-1mRNA水平
使用RT-PCR检测PARP-1基因的转录水平。Primer1的序列是5’-GAGTCCCAGTGGGCAGAGAGAAG-3’；Primer2的序列是5’-GTAGTTCGGGTAGTAGAGCCTTTT-3’；
GAPDH是内部对照，Primer3和Primer4的序列是5’-ACAGCCGCATCTTCTTGTGCA-3’和5’-CTTGGCAGCACCAGTGGATG-3’。
3.结果
3.1PARP-1siRNA抑制了PARP-1mRNA的表达
在使用PARP-1siRNA转染卵巢癌细胞24小时后，PARP-1mRNA水平与CONTOLsiRNA转染相比下降到20%（图1）。
3.2RNA干扰抑制了SKOV3和A2780卵巢癌细胞的增殖
RNA干扰抑制PARP-1表达显著抑制了SKOV3和A2780卵巢癌细胞的增殖率。使用PARP—1siRNA转染24个小时，SKOV3