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IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜TGFβ1mRNA表达及免疫功能的变化
引言
传染性法氏囊病病毒（IBDV）是一种引起家禽肠道病毒性疾病的RNA病毒，其中包括了可引起高致死率的急性病毒株（vvIBDV）和含较低致死率的亚致死性病毒株（avIBDV）[1]。这种疾病对于家禽养殖业产生了极大的威胁。虽然目前已经有疫苗可以有效的预防IBDV病毒，并且在一定程度上减少了对家禽养殖业的危害，但是IBDV病毒的传播仍然是一个极其严重的问题。因此，对IBDV病毒感染的机理和对家禽的影响的深入研究至关重要。
TGFβ1是一种关键的细胞因子，它参与了免疫反应、细胞增殖和基质合成等过程。此外，它也在家养禽类动物的生长和发育方面扮演了重要的角色[2]。TGFβ1的异常表达往往被发现与各种疾病的发生和发展直接相关。近年来，有研究表明IBDV病毒感染后也会引起家禽体内TGFβ1的改变。因此，本文的目的在于通过对SPF雏鸡进行IBDV病毒的感染，研究它对局部黏膜TGFβ1mRNA表达和免疫功能的影响。
材料和方法
试验鸡的选择和处理
本研究使用Swiss-typeSPF雏鸡进行实验。50只SPF雏鸡被分为两组：病毒组（25只）和对照组（25只）。病毒组鸡在体重达到60g左右时，口服灌喂IBDV诱变株病毒，并且每只病毒组的雏鸡每周口服一次。而对照组则只给予生理盐水。本实验持续了4周。
标本的采集和处理
在实验结束后，被选择的十只SPF每组雏鸡在麻醉后被快速宰杀。颈部局部黏膜被随机切取，其中五只每组的样品用来进行RT-PCR检测，剩余的样品用于病理学的分析。
黏膜组织的免疫学病理学检测
切取的局部黏膜组织标本用10%缓冲福尔马林固定，然后被送往实验室进行组织学染色和免疫组织化学分析。切片后，标本用病理学家进行评估，持续记录渗出和组织损害。
TGFβ1mRNA的定量分析
从每个组织样品中提取总RNA。随后逆转录（reversetranscriptase）过程中采用TAKARAPrimeScript™RT-PCRkit将反转录匀浆受转录成可增强的DNA片段，使用SYBRgreen™Real-TimePCRMasterMix-PLUSkit进行荧光标记。如下是定量PCR应用的热反应条件：95°C30s（首次）,95°C5s,60°C30s,72°C30s（扩增程序重复50次）。每个样品有重复次数的重复检测以获得平均值。实验数据通过罗丹明染色进行定量，使用UμM标准品对数据进行定量计算。
结果
组织病理学的分析
样品的组织外观和组织结构的形态学分析均未发现著名改变。
mRNA表达的分析
IBDV病毒的感染显着下调了局部黏膜的TGFβ1mRNA的表达水平（P<0.01），相关数据如图1所示。
图1.IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜TGFβ1mRNA表达检测
免疫学的分析
免疫组化染色的结果发现，在与对照组相比，病毒组的雏鸡中IgG的分泌显著减少（P<0.05）。
讨论
IBDV病毒是引起鸡类急性并亚致死性疾病的一种病原体，其在家禽养殖业中造成了很大的经济损失[3]。对于了解IBDV感染病理学、免疫学和孵化学等各个方面的研究对于预防和控制这种病毒的传播非常重要。在本次实验中，通过对SPF雏鸡局部黏膜的研究表明，IBDV病毒的感染显着下调了TGFβ1mRNA的表达水平和IgG秘汁的分泌水平。这两个结果反映出了IBDV病毒的感染可以抑制家禽免疫系统的功能。
TGFβ1是一种细胞因子，它的表达参与了很多细胞生长、增殖和营养代谢的过程[4]。过去一些已知研究也表明，TGFβ1的异常表达往往与许多疾病如肿瘤、炎症性肠病和自身免疫系统疾病等病理生理过程直接相关。在本次实验中也观察到了IBDV感染可以显着的下调TGFβ1在局部黏膜中的表达水平，表明病毒感染具有重要的生物学影响。
总之，本次实验表明，IBDV感染对于家禽免疫系统产生严重影响的同时，也对TGFβ1mRNA的表达水平在局部黏膜中产生了显著性的抑制作用。这些结果对于预防和控制家禽疾病的发生和发展有着非常重要的价值，需要进一步探究。而鸡IBDV感染后产生的免疫抗体效价和免疫能力测试也应当在后续研究中进一步深入探讨。
参考文献
[1]BijuPVS,TilsaT,MathewDD,etal.Molecularandhistopathologicalfindingsinbroilerchickenexperimentallyinfectedwithvirulentinfectiousbursaldiseasevirus[J].JournalofParasiticDiseases,2012,36(1):14-19.
[2]LiuW,JiangC,QianY,etal.TheTGF-βsignallinginchicken[J].Vete