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大鼠肝脏70％门静脉分支结扎所致肝纤维化与HNF-4α的关系的开题报告
一、研究背景与意义
肝纤维化是严重危害人类健康的一种慢性疾病，常由长期的肝脏损伤、炎症反应和肝细胞凋亡引起。肝纤维化过程中，肝脏纤维化成分增加，肝细胞消失、肝血管分布不均、切片中出现各种异物，导致肝脏结构和功能失调，甚至失明。因此，探究肝纤维化的发病机理和潜在诱导因素对引导相关疾病的临床治疗有重要意义。大鼠肝脏70%门静脉分支结扎模型是制备肝纤维化的经典实验模型。门静脉分支结扎后，肝内动脉供血相对缺乏，会引起肝细胞缺氧损伤，进而诱导肝细胞和肝组织的重塑，最终造成肝纤维化。而HNF-4α，是一种肝脏特异性转录因子，参与了调控肝细胞特异性发育和生长，维持了肝细胞的谷氨酰转移酶、肝脏转氨酶等酶的基础水平，是维持正常肝脏功能的关键转录因子。
通过了解70%门静脉分支结扎后HNF-4α在肝纤维化过程中的表达变化，可以了解HNF-4α水平与肝纤维化的相关性，为深入挖掘HNF-4α参与肝纤维化的发病机制和临床诊断治疗提供参考。
二、研究内容与方法
1.研究内容
通过对野生品系大鼠，于门静脉分支处结扎阻断70%，建立大鼠肝纤维化模型。建模成功后，将大鼠分为正常组和模型组。正常组大鼠行手术但未结扎门静脉；模型组大鼠进行门静脉分支结扎导致肝纤维化过程。对两组大鼠，分别行肝组织HE染色与Masson染色观察肝纤维化程度，Westernblotting和实时荧光定量PCR实验检测门静脉分支结扎对HNF-4α表达的影响。
2.研究方法
（1）动物模型构建
选择体重为250~300g的SD大鼠，行腹壁剖开手术，控制肝脏，将70%门静脉分支处用6-0丝线结扎。操作完成后缝合切口。
（2）组织样本制备
选择肝脏组织标本，分别采用冰冻切片和石蜡包埋切片，用HE染色和Masson染色观察肝纤维化程度。
（3）Westernblotting
将组织蛋白质提取，进行Westernblotting检测肝组织中HNF-4α蛋白质的表达水平。
（4）实时荧光定量PCR
提取RNA样品，采用实时荧光定量PCR技术检测HNF-4α基因的mRNA表达水平。
三、预期结果与意义
预计通过本实验，可以明确70%门静脉分支结扎后HNF-4α表达的变化情况，并验证HNF-4α在肝纤维化过程中的作用。从而为肝纤维化诊断治疗提供新的切入点，也为在其他肝脏疾病方面提供一定的参考价值。