鼠伤寒沙门氏菌菌毛FimA与PefA蛋白的原核表达及纯化的开题报告.docx

鼠伤寒沙门氏菌菌毛FimA与PefA蛋白的原核表达及纯化的开题报告
一、选题背景
鼠伤寒是一种由沙门氏菌属细菌引起的肠道传染病，几乎在所有国家和地区都有发生。鼠伤寒沙门氏菌是沙门氏菌的一个亚种，能够引起严重的感染病症，包括发热、腹泻和败血症等。鼠伤寒沙门氏菌与其他沙门氏菌属细菌的区别在于其菌毛FimA和PefA的特征。这两种蛋白对于细菌的毒力有着重要的作用。
因此，本研究旨在开展鼠伤寒沙门氏菌菌毛FimA和PefA蛋白的原核表达及纯化研究，为深入了解鼠伤寒沙门氏菌的生物学特性和致病机理提供基础研究支持。
二、研究内容与方法
1.研究内容
本研究主要包括以下三个方面的内容：
（1）鼠伤寒沙门氏菌菌毛FimA和PefA基因的克隆及构建重组表达质粒
（2）重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中的表达条件优化
（3）重组蛋白的原核表达、纯化及其功能分析
2.研究方法
（1）FimA和PefA基因的克隆及构建重组表达质粒
从鼠伤寒沙门氏菌的基因库中克隆FimA和PefA基因，并将其插入到表达载体pET28a(+)中。构建合成的重组表达质粒。
（2）重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中的表达条件优化
通过改变IPTG诱导浓度、感染菌株的细菌培养状态、温度等条件，确定最优的表达条件。
（3）重组蛋白的原核表达、纯化及其功能分析
将大肠杆菌BL21(DE3)细胞中表达的重组蛋白进行纯化和定量，研究其相应的生物学活性，进而深入了解其对细菌致病机理的贡献。
三、预期研究成果及意义
1.预期研究成果
（1）FimA和PefA基因的克隆及构建重组表达质粒
（2）最优表达条件的确定
（3）原核表达和纯化出的FimA和PefA蛋白
2.研究意义
鼠伤寒沙门氏菌的致病机理复杂，其菌毛FimA和PefA蛋白对细菌的致病性有着重要的影响。本研究将为深入了解鼠伤寒沙门氏菌的生物学特性、致病机理和疫苗研发提供重要的基础支撑，还可为其他细菌的生物学研究提供参考。