克氏原螯虾两种SOD基因克隆与功能研究的任务书.docx

克氏原螯虾两种SOD基因克隆与功能研究的任务书
任务说明：
克氏原螯虾是一种常见的淡水甲壳动物，它具有抗氧化和抗病毒的能力，这得益于其体内一系列酶的作用。其中，超氧化物歧化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶，能够催化超氧阴离子的歧化反应，防止发生自由基链式反应。本任务旨在克隆克氏原螯虾体内的两种SOD基因，并对其功能进行研究，探讨其在抗氧化和抗病毒方面的作用，为进一步揭示其免疫机制提供理论基础。
任务步骤：
1、确定克氏原螯虾两种SOD基因的已知序列，并设计引物；
2、收集克氏原螯虾组织样本，分别提取细胞总RNA，并通过反转录酶链式聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增得到两种SOD基因序列；
3、将扩增得到的SOD基因插入到原核表达载体pET28a(+)中，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组SOD蛋白；
4、通过蛋白电泳和Westernblotting等技术检测克隆得到的重组SOD蛋白，验证克隆结果的准确性；
5、分别采用invitro和invivo两种模式探讨两种SOD基因在抗氧化和抗病毒方面的作用；
6、应用其他分子生物学技术，比如基因敲除和整合素互作实验等，进一步研究两种SOD基因在抗氧化和抗病毒方面的机制；
7、结合以上实验结果，从分子水平揭示克氏原螯虾体内SOD等酶的协同作用，深入探究其抗氧化和抗病毒的免疫机制。
参考文献：
1.Yin,S.,Zhou,X.,Huang,Y.,Guan,H.,Liu,Y.,&Wei,L.(2018).Amanganesesuperoxidedismutase(MnSOD)withlowspecificityforsuperoxideradicalinChinesemittencrabEriocheirsinensis.Fish&shellfishimmunology,77,165-174.
2.Lin,F.,Shi,S.,Jiang,F.,Yang,X.,Che,Z.,Wang,Y.,&Wang,Q.(2016).Cloningandcharacterizationofacopper/zincsuperoxidedismutasegeneinLitopenaeusvannamei.Fish&shellfishimmunology,54,611-618.
3.Novoa,B.,Romero,A.,Mulero,I.,Rodríguez,I.,Fernández,I.,&Figueras,A.(2006).Zebrafish(Daniorerio)asamodelforthestudyofvaccinationagainstviralhaemorrhagicsepticemiavirus(VHSV).Vaccine,24(31-32),5806-5816.