HPLC高效液相色谱培训.ppt

高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。
它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：1．高效液相色谱法与经典液相色谱法2．HPLC与GC(3)GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC法则经常可在室温条件下工作。
总之，HPLC是吸取了GC与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。
HPLC主要缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。3.液相色谱分离原理及分类第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器二、主要部件（mainassemblyofHPLC）
第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器（动画）第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器4．进样系统第二节高效液相色谱仪器5.分离系统——色谱柱第二节高效液相色谱仪器6．检测系统第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器二极管阵列检测器（DAD）优点：第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器第二节高效液相色谱仪器色谱柱流出液导入雾化器，被载气（压缩空气或氮气）雾化成微细液滴，液滴通过加热漂移管时，流动相中的溶剂被蒸发掉，只留下溶质，激光束照在溶质颗粒上产生光散射，光收集器收集散射光并通过光电倍增管转变成电信号。因为散射光强只与溶质颗粒大小和数量有关，而与溶质本身的物理和化学性质无关，所以ELSD属通用型和质量型检测器。
适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测。其灵敏度与载气流速、汽化室温度和激光光源强度等参数有关。与示差折光检测器相比，它的基线漂移不受温度影响，信噪比高，也可用于梯度洗脱。第二节高效液相色谱仪器。

。一、液-固吸附色谱法(LSAC)liquid-solidadsorptionchromatography第三节HPLC分离类型与原理2．固定相3.流动相第三节HPLC分离类型与原理第三节HPLC分离类型与原理第三节HPLC分离类型与原理在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越显著越好。
根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。
正相分配色谱normalphase：采用流动相的极性小于固定相的极性，它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。
反相分配色谱reversephase：采用流动相的极性大于固定相的极性。它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。三、化学键合相色谱法（CBPC）chemicalbondedpartitionchromatography第三节HPLC分离类型与原理第三节HPLC分离类型与原理2．键合固定相的制备
（l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相,它是最先用于液相色谱的健合固定相。用醇与硅醇基发生酯化反应：
≡Si－OH＋ROH→≡Si－OR＋H20
由于这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。
（2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相
制备反应如下共价键健合固定相不易水解，且热稳定较硅酸酯好。
缺点是格氏反应不方便；当使用水溶液时，必须限制pH在4～8范围内.（3）硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相
制备反应如下：3．反相键合相色谱法3．反相键合相色谱法关于反相键合相色谱的分离机理，可用所谓疏溶剂作用理论来解释。
这种理论把非极性的烷基键合相看作一层键合在硅胶表面上的十八烷基的“分子毛”，这种“分子毛”有较强的疏水特性。
当用极性溶剂为流动相来分离含有极性官能团的有机化合物时，一方面，分子中的非极性部分与固定相表面上的疏水烷基产生缔合作用，使它保留在固定相中；而另一方面，被分离物的极性部分受到极性流动相的作用，促使它离开固定相，并减小其保留作用，见下图。显然，两种作用力