血管内皮抑素(恩度)抑制角膜新生血管的实验研究的任务书.docx

血管内皮抑素(恩度)抑制角膜新生血管的实验研究的任务书
任务书
题目：血管内皮抑素(恩度)抑制角膜新生血管的实验研究
背景：角膜新生血管是一种常见的眼科疾病，通常伴随着角膜炎症、干眼症及角膜营养不良等眼部疾病。其严重影响着眼部的正常功能和患者的生活质量。目前，常规的治疗方法包括使用角膜移植、光动力疗法、化学治疗等等。然而，这些方法均存在一定的风险，在机会上也存在一定的问题。因此，寻找一种安全有效的治疗方法至关重要。
目的：血管内皮抑素(恩度)是一种皮肤细胞的生长因子，被广泛应用于治疗异种移植、炎症和肿瘤等疾病。然而，其在治疗角膜新生血管方面的疗效及作用机制仍不清楚，因此，本次实验将探究其对角膜新生血管的抑制作用与作用机制。
任务和方法：
1.筛选恩度最佳浓度
（1）将100只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为5组，采用角膜碱蚀法制作角膜新生血管模型。
（2）第一天，将每只大鼠眼部分为两组，分别涂抹0.1ml含不同浓度病毒感染的adenoviru-S,和感染空载体病毒PBS。
（3）第2天，共朵恩度38ug注射于左眼，同时右眼注射等量生理盐水；
（4）观察和比较恩度对造模成功大鼠眼球的影响，选择最佳浓度的恩度准备下一步研究。
2.观察恩度抑制角膜新生血管的效果
（1）取同样数量的大鼠和角膜碱蚀法制作角膜新生血管模型。
（2）将大鼠分为三组，每组10只，分别涂抹含0.1ml上手酮(3%)(治疗组)，含0.1ml纯DMSO(辅助治疗组)和PBS(对照组)。
（3）第2天，朵恩度38ug注射于治疗组和辅助治疗组左眼，PBS注射于对照组左眼，同时右眼注射等量的生理盐水。
（4）用小动物活体荧光成像系统(BeVision,美国Berkley灵敏度5×10-8mol/L.)观测两个月内角膜新生血管的生长和发展情况。
3.探索恩度抑制角膜新生血管的作用机制
（1）采集各组角膜组织，制备组织病理学切片，并进行HE染色。
（2）采用光镜观察各组角膜组织，包括新生血管密度、毛细血管密度和上皮细胞密度。
（3）采用RT-PCR和Westernblot技术分别检测各组抑制血管相关基因VEGF,VEGFR1和VEGFR2的表达，以及涉及内皮细胞增殖的MMP2和MMP9的表达。
（4）通过体外培养人角膜内皮细胞CRL-11104系细胞，进一步确认恩度对角膜内皮细胞的增殖和迁移的作用。
预期成果：
本次实验主要探究恩度对角膜新生血管的抑制作用及作用机制，预期可以得到以下方面的成果：
1.筛选出最佳的恩度浓度，为后续实验提供可靠的数据基础。
2.通过与对照组和辅助治疗组的对比，展示恩度在抑制角膜新生血管方面的效果，为临床治疗提供数据支持。
3.通过采集各组角膜组织，进行HE染色以及RT-PCR和Westernblot技术的检测，探索恩度抑制角膜新生血管的作用机制。
4.经过体外培养的人角膜内皮细胞CRL-11104系细胞，检测恩度对其增殖和迁移的作用。
预期结果：
预期结果是通过实验得到数据和分析得出以下结论：
1.恩度浓度较差时，对角膜新生血管的抑制作用有限。
2.恩度可以有效抑制角膜新生血管的生长和发展，表现出一定的治疗效果。并且，其与上手酮联合使用，可达到更好的治疗效果。
3.恩度可以通过调节内皮细胞相关基因和蛋白的表达，进而发挥对角膜新生血管的抑制作用。
4.恩度抑制角膜新生血管的作用机制与其对内皮细胞增殖和迁移的抑制有关。
参考文献：
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