野黄芩苷增敏顺铂抗非小细胞肺癌以及对顺铂肾毒性保护作用研究的任务书.docx

野黄芩苷增敏顺铂抗非小细胞肺癌以及对顺铂肾毒性保护作用研究的任务书
一、研究背景
非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC）是肺癌的一种常见类型，也是恶性肿瘤中的一种高发类型。铂类药物是NSCLC的一线治疗药物，其中顺铂是最常用的一种。然而，顺铂的应用常常受到其肾毒性的限制。因此，寻找能够提高顺铂疗效、减轻肾毒性的辅助药物，对于NSCLC的治疗具有重要意义。
野黄芩苷是一种植物提取物，已被证明对多种恶性肿瘤有着明显的抗癌作用，且具有一定的抗氧化活性，可以减轻药物对肾脏的损伤。然而，野黄芩苷对于其增强顺铂疗效和保护肾脏的作用还需进一步研究。
因此，本研究旨在探讨野黄芩苷与顺铂联合使用对NSCLC的影响，以及其对顺铂肾毒性的保护作用。
二、研究目的
本研究旨在：
1.探究野黄芩苷与顺铂联合使用对NSCLC细胞生长的影响。
2.探究野黄芩苷与顺铂联合使用对顺铂敏感性的影响。
3.探究野黄芩苷与顺铂联合使用对顺铂肾毒性的保护作用。
三、研究内容
1.实验材料与方法
1.1实验材料
NSCLCA549细胞系、人肾上皮细胞HK-2、铂类药物顺铂、野黄芩苷、MTT试剂盒、无菌PBS、甲醛、乙醇等。
1.2实验方法
1.2.1细胞培养
将A549细胞系和HK-2细胞分别在RPMI-1640培养基和DMEM培养基中培养，添加10%体积分数的胎牛血清，100U/ml的青霉素、0.1mg/ml的链霉素，放置于37°C的恒温培养箱中孵育。
1.2.2MTT法检测细胞增殖
将A549细胞分别分为5个组，分别为对照组、顺铂组（5μg/ml）、野黄芩苷组（20μM）、低剂量联合组（2.5μg/ml顺铂+10μM野黄芩苷）、高剂量联合组（5μg/ml顺铂+20μM野黄芩苷）。以三孵泡的方式添加各组细胞，在试剂加入后培养24h，100μlMTT溶液（5mg/ml）在每个孔上添加，培养4h后加入200μl的DMSO混合液，最后检测吸收值。
1.2.3流式细胞术检测凋亡率
取相应的细胞，使细胞贴附的Petri盘分成4个方块。对于各组细胞，在试药处理后，用PBS洗涤一遍后，将含50μlAnnexinV增敏液的溶液加入到其中，室温培养30min。之后加入加50μlpropidiumiodide（PI）核染液，室温半小时暴露光线，流式细胞仪检测凋亡率。
1.2.4切片检测细胞形态
为检测细胞的形态，将各组细胞分别进行甲醛和乙醇固定后，用半纤维素切片，染色后用光学显微镜观察细胞的形态。
1.2.5检测顺铂肾毒性
将对照组、顺铂组、野黄芩苷组、低剂量联合组、高剂量联合组的细胞培养液放入96孔板中，添加HPLC-MS/MS法检测方法适配的反应液，检测各组细胞的肾功能。
2.预期结果
2.1野黄芩苷将可以增加顺铂对A549细胞的杀伤作用，并降低细胞活力。
2.2野黄芩苷将能够提高低浓度顺铂对A549细胞的敏感性。
2.3野黄芩苷将可对顺铂引起的肾毒性起到一定的保护作用。
3.讨论与意义
本研究将为野黄芩苷作为顺铂高效联用药的进一步研发以及作为顺铂肾毒性治疗剂研究提供实验基础，对于加速NSCLC的药物研究和临床应用具有一定的贡献。