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调控PKM2对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究的任务书
任务书：调控PKM2对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
一、研究背景
胃癌是世界上最常见的癌症之一，尤其在亚洲地区发病率较高。化疗一直是治疗胃癌最常用的手段之一，但是药物治疗的有效性和耐受性仍然存在一定限制。因此，寻找新的治疗方法、发现新的靶向治疗药物是当下胃癌研究的重要课题之一。
在过去几年中，代谢调节途径在肿瘤治疗中受到越来越多的关注。PKM2作为一种糖酵解途径的调控因子在肿瘤发生和发展中扮演着重要角色。已有研究表明，PKM2在胃癌中表达水平显著升高，因此，调控PKM2的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响成为研究的重点。
二、研究目的
本研究旨在通过调控PKM2的表达，探究其对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制，为胃癌的治疗提供新的思路和方法。
三、研究内容
1.通过siRNA或体外转染，调控PKM2的表达水平；
2.采用CCK8实验、克隆形成实验以及流式细胞术等技术，研究PKM2调控胃癌细胞增殖和凋亡的影响；
3.采用Westernblot和RT-PCR等技术，研究PKM2调控相关信号通路如PI3K/AKT/mTOR、MAPK等的作用；
4.采用流式细胞术及细胞凋亡试剂盒等技术，研究PKM2调控胃癌细胞凋亡的信号通路；
5.利用体内移植瘤模型，验证调控PKM2表达对胃癌生长的影响。
四、研究意义
本研究的主要意义在于深入探究PKM2在胃癌细胞增殖和凋亡中的作用机制，为胃癌治疗提供新的治疗思路和药物靶向。同时，可以为其他肿瘤的研究提供借鉴和参考。
五、研究方法
1.细胞培养及处理：通过常规方法将胃癌细胞株MGC-803培养至合适状态，再通过siRNA或体外转染等方法调控PKM2的表达水平。
2.CCK8实验：CCK8试剂盒检测不同处理组细胞增殖情况。
3.克隆形成实验：分别将处理后的胃癌细胞MGC-803种植于含有0.3%琼脂的培养基中，克隆形成情况。
4.Westernblot和RT-PCR检测：分别采用Westernblot和RT-PCR技术检测PKM2及相关蛋白的表达水平。
5.流式细胞术及细胞凋亡试剂盒：采用流式细胞术探究PKM2调控胃癌细胞凋亡的影响，利用细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。
6.体内移植瘤模型：采用Balb/c裸鼠移植模型验证调控PKM2表达对胃癌生长的影响。
六、研究进度
1.5月-6月：熟悉实验操作，准备实验所需试剂和酶标仪、荧光显微镜等实验器材。
2.6月-8月：胃癌细胞的处理及调控PKM2的表达。通过体外转染和siRNA调控PKM2的表达水平，分别分为实验组、阴性对照组和空白对照组。
3.8月-10月：CCK8实验、克隆形成实验和流式细胞术检测PKM2调控胃癌细胞增殖和凋亡的影响。Westernblot和RT-PCR技术检测PKM2和相关蛋白的表达水平，并研究PKM2调控相关信号通路的作用。
4.10月-12月：利用细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况，并在Balb/c裸鼠移植模型中验证调控PKM2表达对胃癌生长的影响。
5.12月-1月：数据分析和文章撰写。
七、经费预算
1.试剂费：5000元；
2.实验器材：10000元；
3.勘误费：1000元；
4.实验动物费：2000元；
5.人员科研经费：30000元。
八、参考文献
1.朱丹.PKM2与肿瘤恶性生长的关系.国外医学(肿瘤学分册).2015.
2.蔡瑞丽.PKM2在胃癌中的作用及相关机制的研究.中国医药导报.2018.
3.杨玲芳.PKM2调控胃癌细胞增殖的机制.中国新医药杂志.2019.