重楼皂苷单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立的任务书.docx

重楼皂苷单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立的任务书
任务书
课题名称：重楼皂苷单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
任务目标：
开发一种针对重楼皂苷的单克隆抗体及建立一种高灵敏度、高特异性的ELISA检测方法，为重楼皂苷的定量检测提供支持。
任务背景：
重楼皂苷是一种生物活性成分，可以用作药物、保健品、化妆品等领域，其含量的准确测定对于产品质量控制及药效研究具有重要意义。目前已有一些检测方法，但其繁琐、耗时、灵敏度低，难以满足生产和研究的需求。因此，开发一种高灵敏度、高特异性的ELISA检测方法对于重楼皂苷的定量分析非常有必要。在此基础上，建立一种重楼皂苷单克隆抗体可用于定量测定重楼皂苷，同时为重楼皂苷的进一步研究提供了更加可靠的方法。
任务实施：
1.重楼皂苷单克隆抗体制备
1.1重楼皂苷抗原的制备
利用超声辅助提取从根茎中提取重楼皂苷，纯化抗原并纯化后保存；
1.2单克隆抗体制备
根据需求选择合适的动物，免疫重楼皂苷抗原，获得骨髓、脾细胞等淋巴细胞，并合并成细胞。以多羟甲基乙烷基八氟辛磺酸钠（PFOS）等物，发动细胞融合，以ELISA检测筛选，获得单克隆抗体。
2.ELISA检测方法的建立
2.1试剂的准备
2.1.1酶标板的涂布溶液：选择最优浓度的抗原，构建适合其特异性的酶标板涂布溶液；
2.1.2血清抗体的稀释液：选择酶标纯化的重楼皂苷单克隆抗体，在一定浓度下稀释，用作ELISA检测时的抗体；
2.1.3细胞和琼脂糖：浓度干燥后，适量的细胞和琼脂糖可以减少试剂的使用。
2.2标准品的制备
根据已有的重楼皂苷浓度和波长，制备系列标准品，构建标准曲线。
2.3ELISA的检测流程
2.3.1抗原的固定：按照一定的浓度将抗原溶液加到微孔板孔内，使其吸附在酶标板表面上；
2.3.2未被固定的位点被阻断：利用特定的物质（如蛋白等）对孔内未被固定的位点进行了阻碍，防止未被固定的位点与待测样品和抗体结合所产生的干扰；
2.3.3样品接触：待测样品稀释后加入孔内，与固定在酶标板上的重楼皂苷抗原相联系合；
2.3.4抗体接触：加入预测的重楼皂苷单克隆抗体或其他相应的检测抗体，将其与重楼皂苷选择性结合；
2.3.5氯霉素酰基葡萄糖酸接触：加入特异性的二抗，牢固结合辅酶物质；
2.3.6重楼皂苷的光度学检测：在波长范围内进行检测，计算样品和重楼皂苷浓度的关系。
任务进度：
2018年3月-2019年3月：重楼皂苷抗原的制备、单克隆抗体的制备及检测；
2019年4月-2019年12月：ELISA检测方法的优化及建立。
任务成果：
1.成功制备高亲和力、特异性的单克隆抗体。
2.建立了高灵敏度、高特异性的重楼皂苷ELISA检测方法，可以进行多样检测，从而为重楼皂苷的快速检测提供更为有效的方法。
3.发表相关的研究论文，促进重楼皂苷的研究。