任务单元抗原抗体的制备.ppt

会计学主要(zhǔyào)内容学习(xuéxí)目标单元(dānyuán)一抗原的制备一、颗粒性抗原(kàngyuán)的制备采集(cǎijí)静脉血(二)细菌(xìjūn)抗原的制备1.制备(zhìbèi)方法2.细菌(xìjūn)抗原的检定二、可溶性抗原(kàngyuán)的制备二、可溶性抗原(kàngyuán)的制备（一）材料(cáiliào)的选取与预处理二、细胞(xìbāo)裂解2.超声波破碎(pòsuì)法/3.酶处理(chǔlǐ)法4.反复(fǎnfù)冻融法5.表面(biǎomiàn)活性剂处理法（三）可溶性抗原(kàngyuán)纯化（1）超速离心法（2）选择性沉淀法（3）凝胶过滤法（4）离子交换(lízǐjiāohuàn)层析法（5）亲和层析法/2.核酸(hésuān)抗原的制备/核酸的保存
（1）温度(wēndù)
-70℃长期保存
-20℃
4℃（5℃）最佳和最简单
（2）介质
TE缓冲液（最常用）3.脂多糖(duōtánꞬ)抗原的制备4.Ig片段(piànduàn)的制备（2）共价键解离法
二硫键是连接免疫球蛋白肽链的共价键，解离二硫键可将轻链与重链分开。解离的方法多采用氧化法和还原法。氧化法的优点是切开二硫键后，肽链不能重新形成二硫键，便于肽链纯化，缺点是蛋氨酸(甲硫氨酸)被氧化成亚砜，色氨酸侧链被破坏。
还原法目前常用，其原理是将二硫键还原成巯基，但还原的琉基极不稳定(wěndìng)，易再重新结合成二硫键，必须及时用碘乙酸或碘代乙酰胺进行羧甲基化以封闭巯基。（3）酶解法
酶解法的专一性极好，不同的片段可用不同的酶进行(jìnxíng)裂解。如木瓜酶水解IgG可获得1个Fc段和2个Fab段；胃蛋白酶水解IgG可获得F(ab')：和数个小片段。用木瓜酶水解得到的Fc段常作为抗原来制备抗重链血清，胃蛋白酶水解得到的F(ab')；常作为抗体试剂应用。（四）纯化抗原(kàngyuán)的鉴定、浓缩与保存三、半抗原的制备(zhìbèi)2.多肽聚合物
人工合成的载体。常用多聚赖氨酸(polylysine)，其分子量高达lOOkD以上，是良好的载体。这种多肽聚合物与半抗原结合后，可诱导产生高效(ɡāoxiào)价、高亲合力的抗体。
3.大分子聚合物
羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose，CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidonc，PVP)等大分子聚合物均可与半抗原结合，加入弗氏完全佐剂可诱导动物产生良好的抗体。（二）半抗原与载体的连接方法
1.物理法通过吸附(xīfù)作用。
2.化学法通过交联实现。
（三）半抗原的鉴定
1.目的：测定半抗原与载体的比例。
2.测定方法：
（1）吸收光谱分析法
（2）放射性核素标记半抗原掺入法
（1）如果半抗原有适宜的吸收光谱，测定在一定波长下复合抗原和载体之间克分子吸光度(guāngdù)的差别，然后把这个差别与同样波长下半抗原的克分子吸光度(guāngdù)数相比较，就可以准确地计算出所结合的半抗原分子数。
（2）在偶联反应液中加入一定量的放射性核素标记的半抗原，偶联反应后经充分透析，测量透析袋中的放射性含量，计算结合到载体上的半抗原分子数。四、免疫佐剂（一）佐剂的种类(zhǒnglèi)与制备具备免疫原性的佐剂：如卡介苗、枯草分枝杆菌(gǎnjūn)、短小棒状杆菌(gǎnjūn)、百日咳杆菌(gǎnjūn)、脂多糖、细胞因子等。

不具备免疫原性的佐剂：如氢氧化铝佐剂、磷酸铝、磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、藻酸钙、多聚核苷酸、胞壁肽等。
应用最多的是福氏佐剂、细胞因子佐剂。（1）福氏佐剂：分完全福氏佐剂（石蜡油+羊毛脂+卡介苗）、不完全福氏佐剂（石蜡油+羊毛脂）两种。福氏完全佐剂可提高佐剂效能，但注射(zhùshè)后易产生局部持久性溃疡和肉芽肿，宜注意。
（2）细胞因子佐剂：细胞因子佐剂与抗原合用，可有效激发机体的免疫功能。IL-2、IL-1、IFNγ、IL-12、GM-CSF皆较常应用；细胞因子佐剂还被广泛应用于肿瘤基因治疗中。用于人体(réntǐ)的佐剂：氢氧化铝、明矾、polyI∶C、胞壁酰二肽、细胞因子、热休克蛋白
常用于动物实验的佐剂：弗氏佐剂(Freund’sadjuvant)。2.制备(zhìbèi)制备方法
（1）研磨(yánmó)法
（2）搅拌混合法（注射器混合法）
（3）其他方法超声（二）佐剂的作用(zuòyòng)机制（三）佐剂的应用(yìngyòng)原则小结(xiǎojié)内容(nèiróng)总结