细菌鉴定中常用的生理生化反应.pptx

细菌鉴定中常用的生理(shēnglǐ)生化反应一、实验(shíyàn)目的三、实验(shíyàn)器材培养基
糖发酵培养基，用于糖类发酵试验
葡萄糖蛋白胨水培养基，用于甲基红和V．P试验
蛋白胨水培养基，用于吲哚试验
柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体(gùtǐ)培养基，用于硫化氢试验
柠檬酸钠培养基，用于柠檬酸盐利用试验三、实验(shíyàn)方法及原理糖(醇)类发酵试验
不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢(dàixiè)产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5．2(黄色)一6．8(紫色)]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。糖(醇)类发酵试验
（1）编号在各试管(shìguǎn)上分别标明各种糖名称，所接种的菌名和组号，下同。
（2）接种
（3）培养将已接种好的培养基置37℃温箱中培养24h。
（4）观察结果
（4）观察结果：
被检细菌若能发酵(fājiào)培养基中的糖时，使培养基的pH降低，培养基中的指示剂为黄色；
若发酵(fājiào)培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显黄色，并且在培养基中倒置的小玻璃管(杜氏小管)中有气体。
若被检细菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。实验(shíyàn)结果甲基红(Methylred)试验(简称MR试验)
某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，
丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳
酸等，使培养基的pH降低(jiàngdī)到4．2以
下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是
pH4．4(红色)～pH6．2(黄色)。方法
将待检菌分别接种(jiēzhòng)到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。伏一普二氏试验(shìyàn)(V．P．试验(shìyàn))方法
将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h，取出，加入40％KOH5～10滴，然后再加入等量的5％一萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温(bǎowēn)15～30min，以加快反应速度。若培养物呈现红色，为伏—普反应阳性。靛基质(吲哚)试验
某些细菌能分解蛋白质中的色氨
酸，产生(chǎnshēng)靛基质(吲哚)，靛基质与对
二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色
靛基质(红色化合物)。方法(fāngfǎ)：
将被检菌接种到胰蛋白胨水培
养基中，37℃培养24h～48h后，
沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培
养物液面，观察结果。
结果：
出现红色者为阳性
出现黄色者为阴性。硫化氢试验
某些细菌能分解(fēnjiě)含硫的氨基酸
(胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化
氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁
盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细
菌。方法
将待检菌以接种针
穿刺接种到醋酸(cùsuān)铅或柠
檬酸铁氨培养基中，
37℃培养24h，观察结
果，若有黑色出现者为
阳性。柠檬酸盐利用试验
柠檬酸盐培养基中柠檬酸钠为碳的唯
一来源。有的细菌能利用柠檬酸钠为碳源，因
此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸
盐后产生碳酸钠，使培养基变为碱性。此时培
养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝
色（变色范围(fànwéi)：pH6.0～pH7.6）。
不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养
基上不生长，培养基不变色。方法
取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，37℃培养24h后，观察结果。培养基变深蓝色者为阳性(yángxìng)。培养基不变色，则继续培养7天，培养基仍不变色者为阴性。谢谢(xièxie)大家！